两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMERPREMIER5.0..docx

1. 安装软件Primer premier5.0。程序下载：Primer Premier 5.0 /Soft/2005/114.htm2. 安装好以后就会在程序中双击打开。开始设计克隆目的基因的引物。两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 打开后的界面如图。点FILE---NEW—DNA SEQUENCE如图所示。2 3选中primer图标，点S图标，edit primer,开始设计正义链。2006-3-21 09:48:26 上传下载附件 (41.94 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 软件默认引物为二五个碱基 2006-3-21 09:49:25 上传下载附件 (40.99 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 可将鼠标点在设计框的3端从右向左删除7－9个碱基，保留16－18个配对即可 2006-3-21 09:50:11 上传下载附件 (38.98 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 在引物的5端加入选好的酶切位点并在其左侧加3个保护碱基，入该图加入HIND III酶切位点及TTA保护碱基，完成后点analyze，认为可以后点OK。 2006-3-21 09:51:11 上传下载附件 (40.15 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 选中左上角A图标，用鼠标拉动滑块将待选引物放至目的基因末端。如图，选中EDIT PRIMERS图标，开始设计反义链。2006-3-21 09:51:51 上传下载附件 (41.22 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 使用道具 举报 显身卡 yiii yiii 当前离线 注册时间2004-9-12积分30794最后登录2012-4-5在线时间1429 小时秀蛋白1488 个秀基因20889 个精华31主题19记录9好友257日志3相册0帖子2419UID3IP卡 狗仔卡 Administrator秀蛋白1488 个秀基因20889 个积分30794帖子2419串个门 加好友 打招呼 发消息 4-楼 发表于 2006-3-21 09:56:34 |只看该作者 从3端删除7－9个碱基同正义链。2006-3-21 09:54:12 上传下载附件 (36.92 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 将酶切位点加在5端，应将产品目录所示的酶切位点序列从右至左加入（注意不要加反）如图加入BamH I酶切位点及CGC3个保护碱基。完成后点analyze，认为可以后点OK。2006-3-21 09:54:47 上传下载附件 (38.89 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 最后分析结果如图，反义链的FALSE PRIMING可以不考虑，RATING表示引物评分也可以不考虑，主要看Tm值正义链和反义链相差不应超过3度。GC含量不应超过60％2006-3-21 09:55:27 上传下载附件 (41.17 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 该软件有个缺点，不能保存分析结果，只能选择打印 2006-3-21 09:55:53 上传下载附件 (42.2 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 如果设计RT-PCR检测的引物就如下所示。同上输入目的基因片段，选SEARCH图标，选择参数，一般选PCR primers---both—100至250个碱基，引物长短20＋/-2，search parametere中的参数可以不选，为默认设置。点OK。 2006-3-21 09:56:26 上传下载附件 (39.56 KB) 两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0 6i6CQvCp.jpg (41.22 KB, 下载次数: 89) 2006-3-21 09:53:47 上传下载次数: 89两分钟StepByStep学会引物设计软件PRIMER PREMIER5.0使用道具 举报 显身卡 yiii yiii 当前离线 注册时间2004-9-12积分30794最后登录2012-4-5在线时间1429 小时秀蛋白1488 个秀基因20889 个精华31主题19记录9好友257日志3相册0帖子2419UID3IP卡 狗仔卡 Administrator秀蛋白1488 个秀基因20889 个积分30794帖子2419串个