分子生物学(重点理论及实验操作)..doc

GT-AG 法则 真核生物基因的外显子与内含子接头处都有一段高度保守的一致性序列，即：内含子 5′端大多数是以 GT 开始，3′端大多是以 AG 结束。是 RNA 加工时剪接的信号。 启动子（promoter）是能够被 RNA 聚合酶特异性识别与结合并启动转录的 DNA 序列。 外显子（exon）编码氨基酸序列，在基因转录后经过剪接连在一起，形成成熟的 mRNA，最终参与指导多肽链合成 基因（genes）指存在于 DNA 分子上编码 RNA 或多肽链的功能区段，包括编码序列(外显子)、侧翼序列(含有调控序列)及插入序列(内含子)。基因是决定遗传性状的功能单位. 结构域（domain）蛋白质的三维结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各行其功能，称为结构域。 基因组（genome） 广义上指一个细胞或病毒颗粒所含 DNA 的全部序列（包括编码序列和非编码序列）。即遗传物质的总量。狭义上指一个细胞或病毒颗粒所含基因的总和。 端粒（telomere）真核生物染色体线性 DNA 分子末端由 DNA 和蛋白质组成的一种特殊结构，由短的高度重复序列组成，维持染色体的稳定性和 DNA 复制的完整性。 多基因家族（multigene）指碱基序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的基因。编码产物具有相似的功能。 假基因 与有功能的基因结构相似，但不能表达基因产物的基因。 复制子（replicon）从一个复制起始点开始所复制的 DNA 分子或 DNA 片段。 复制叉（replication fork）复制时，自起点解开双链成两股单链而在起点两侧形成现叉状结构。 半不连续复制（semi-discontinuous replication）DNA 复制过程中，在复制叉处的一条新链的合成是连续的(前导链领头链)，与复制叉前进方向一致。另一条新链的合成是不连续的(尾随链)，与复制叉前进方向相反。 S-D 序列（Shine-Dalgarno sequence，核糖体结合位点）指位于原核生物 mRNA 起始密码（AUG）的上游约 4-13 个碱基处存在的一段富含嘌呤的序列，其一致序列为-AGGAGG-，能与核糖体 30S 亚基中16S rRNA 3′端富含嘧啶的序列结合，与蛋白质合成过程中起始复合物生成有关。 开放阅读框架（open reading frame，ORF）从 mRNA5′端起始密码 AUG 到 3′端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称开放阅读框架。 RNA 编辑（RNA editing）指改变 mRNA 分子中的碱基而使同一基因表达出不同的蛋白质。 分子伴侣（molecular chaperon）指促进、帮助、监视和加速蛋白质进行正确折叠的一类蛋白质分子。热休克蛋白（HSP）、伴侣蛋白（伴侣素） 基因表达（gene expression）指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经过转录、翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。 klenow 片段（DNA 聚合酶Ⅰ大片段）E.coli DNA 聚合酶 I 经部分水解生成的 C 末端 605 个氨基酸残基片段。保留了 DNA 聚合酶 I 的 5′-3′聚合酶和 3′-5′外切酶活性，缺少 5′-3′外切酶活性。 基因打靶（gene targeting）是利用 DNA 同源重组原理，定向地从细胞染色体上移除或移入特定基因的过程。包括基因敲除(置换特定基因使其丧失活性)和基因敲入（代替特定基因）。 真核生物： 初级转录产物— 核不均一 RNA（hnRNA）— 需转录后加工和修饰；5′端加 帽 、3′端加 尾 、切除内含子、连接外含子，才能形成成熟的 mRNA 分子。 真核生物转录后水平的调控： ⑴ 5′端加 帽 ——在 5′端加上 7-甲基鸟苷（m7GPPPmNp—）；保护 mRNA 免遭核糖核酸酶降解，增强 mRNA 的稳定性；协助 mRNA 的剪接；利于 mRNA 自细胞核转运至细胞质；促进 mRNA 与核糖体的结合，启动翻译。3′端加 尾 ——在 3′端加上 50-150 个 A，即多聚腺苷酸尾 poly（A）；保护 mRNA 免遭核糖核酸酶过早降解，有助于保持翻译模板活性。 ⑵ mRNA 前体的剪接 真核细胞基因表达所转录出的 mRNA 前体在剪接酶作用下，有序删除每一个内含子并将外显子拼接起来，形成成熟的 mRNA。 ⑶ mRNA 前体的选择性剪接 选择性剪接（alternative splicing）指从一个 mRNA 前体中通过不同的剪接方式（选择不同的剪接位点组合）产生不同的 mRNA 剪接异构体的过程，而最终的蛋白产物会表现出不同或者是相互拮抗的功能和结构特性，或者，在相同的细胞