实验性脑梗塞中小胶质细胞NOH2O2的动态观察..doc

实验性脑梗塞中小胶质细胞、NO、H2O2的动态观察 文章来源： 　　　　 2006-7-24 9:57:01 ? 实验性脑梗塞中小胶质细胞、NO、H2O2的动态观察 中国临床神经科学 1999年第1期第7卷 论著与交流 作者：殷　伟　吕传真 单位：上海医科大学神经病学研究所(200040) 关键词：脑梗塞；小胶质细胞；一氧化氮；过氧化氢 　　摘要　本研究采用线栓法制备了大鼠的实验性脑梗塞模型，通过Lectin染色观察小胶质细胞的变化，通过微透析获得缺血基底区的细胞外液，测定了NO、H2O2的变化。结果表明，脑缺血30 min，再灌注早期0.5 h神经元变性坏死较轻，随着再灌注时间的延长，神经元坏死程度逐渐扩大。再灌注0.5 h基底区的小胶质细胞活化，NO及H2O2水平增高(P＜0.05)。随着再灌注时间的延长至6 h，小胶质细胞的变化不大，而NO及H2O2水平降低。 The Dynamic Observation of Microglial Cell,NO 　　and H2O2 in Experimental Cerebral Ischemia Yin Wei,Lu Chuanzhen 　　Institute of Neurology,Shanghai Medical University 200040 　　Abstract:This study prepared rat experimental cerebral ischemia model by suture occlusion.The change of microglial cell was observed by Lectin labelling.In the meantime,the changs of NO,H2O2 in microdialyses from basal ganglia were measured.The results showed that after occlusion of 30 minutes,reperfusing for 0.5 hours caused mild necrosis,with reperfusing,the zone of necrosis was enlarged.After reperfusing for 0.5 hours,microglial cell was activated,the level of NO and H2O2 was increased(P＜0.05),with reperfusing up to 6 hours,the change of microglial cell was little,but the level of NO and H2O2 was decreased gradually. 　　Key Words　Cerebral ischemia microglial　Nitric　Oxide(NO)　Hydrogen peroxide(H2O2) 　　脑梗塞中，多种细胞及效应分子参与其病理生理过程，而且互相形成网络，作用十分复杂。为此，有必要观察一下脑梗塞后不同时间细胞及效应分子的动态变化。文献表明，缺血引起的神经元变化常伴随着胶质反应，在轻度神经元损伤而血脑屏障未受损时，小胶质细胞是主要的反应细胞［1］，并分泌多种介质，其中包括反应性氧产物。鉴于小胶质细胞及多种介质在脑梗塞中的变化和作用具有双相性［2］，本实验采用局灶性脑缺血模型，动态观察脑缺血后不同再灌注时间点的神经元变性坏死、小胶质细胞、一氧化氮(NO)、过氧化氢(H2O2)等的变化及其相关性，试图为脑缺血再灌注损伤的病理生理过程的研究提供理论依据。 　　材料与方法 　　1、大鼠实验性脑梗塞模型的制备 　　健康雄性SD大鼠，体重230～300 g，上海医科大学动物部提供。随机将动物分成7组：正常组3只，假手术组3只，缺血30 min再灌注0.5 h组、1 h组、2 h组、4 h组、6 h组各3只。采用进口的3-0单股尼龙手术结扎线阻塞左侧大脑中动脉30 min，建立大鼠局灶性脑缺血模型，拔掉插线，进行再灌注。 　　2、神经元变性坏死的检测 　　分别于再灌注0.5、1、2、4、6h，4%多聚甲醛心脏灌注固定，断头取脑，制备石蜡切片，经H-E染色，光镜下观察。 　　3、小胶质细胞活性的观察 　　石蜡切片，脱蜡后进行Lectin染色，方法简介如下：含0.1% Triton X-100的PBS中平衡15 min，加入40 μg/ml GSA I-B4-HRP(辣根过氧化物酶标记的Griffonia Simplicifoia B4-isolectin)，4℃孵育过夜，DAB-H2O2显色5 min，脱水，透明，封