高速逆流色谱原理及应用[精选].ppt

* 四、高速逆流色谱应用 实例3、芫荽中的芫荽异香豆精、二氢 芫荽异香豆精、芫荽异香豆酮A和B（高速逆流色谱与超临界CO2流体萃取结合）（酮类化合物） HSCCC条件： 溶剂体系：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水 (3 : 7 : 5 : 5) Chen, Q. Food Chemistry, 2009. 117(3): p. 504-508. * 四、高速逆流色谱应用 芫荽异香豆酮B 90.21% 芫荽异香豆酮A 90.98% 芫荽异香豆精 99.15% 二氢芫荽异香豆精 96.25% Chen, Q. Food Chemistry, 2009. 117(3): p. 504-508. * * 这是本次报告的内容，我主要从发展、原理、特点、应用四个方面来简单介绍高速逆流色谱 11s * * 高速逆流色谱诞生于1982年，由美国国立卫生院Ito博士等人研究并提出。它是一种不同于传统液相色谱法的现代色谱分离制备技术 我国是继美国、日本之后最早开展逆流色谱应用的国家。张天佑等在国内首先自行研制了分析型和制备型的高速逆流色谱仪，对我国中药功能成分的分离制备取得了显著成果。90 年代以来，高速逆流色谱y已被广泛地应用于天然药物成分的分离制备和分析检定中。40s * * 逆流色谱源于20世纪50年代的多级萃取技术，该技术设备庞大复杂、易碎、溶剂体系容易乳化，溶剂耗量大，分离过程不连续，分离时间长。12s * * 20世纪70年代出现了液滴逆流色谱，利用流体静力学原理，实现了连续萃取分离的目的，但分离时间过长、连接处容易出现渗漏。之后出现的离心分配色谱，利用流体静力学原理，减少了分离时间，但连接处较多而且容易出现渗漏，清洗维护复杂。1982年，告诉逆流色谱出现。20s * * 介绍高速逆流色谱原理前我们先来了解一个２０世纪６０年代发现的有趣现象：互不相溶的两相溶剂在绕成螺旋形的小孔径管子里分段割据，能实现两溶剂相之间的逆向对流。高速逆流色谱就利用了这一现象。15s * * 该图为高速逆流色谱的原理图。图中螺旋管柱自转轴心与公转轴距离Ｒ，两轴线平行。通过齿轮传动，使螺旋管柱实现在绕仪器中心轴线公转的同时，绕自转轴作相同方向相同角速度的自转。通过公转、自转产生的二维力场，保留两相中的其中一相作为固定相通过高速旋转提高两相溶剂的萃取频率。30s * * 公转离心力Ｆ１ 与螺旋管自转离心力Ｆ２ 方向一致时固定相与流动相分离，而Ｆ１ 与Ｆ２ 方向相反时，两相充分混合。分离时较重的溶剂相在外部，较轻的溶剂相在内部，两相形成一个线状分界面。15s * * 该图为将螺旋管拉直后的示意图，更明显地表示了混合区域在螺旋管内的移动。每个混合区带都向螺旋管的首端行进，其行进速率和管柱的公转速率相同。这表明，当流动相恒速通过固定相时，两相溶剂都在反复进行混合和静置的分配过程，这一过程频率极高。所以高速逆流色谱有相当高的分配效率。20s * * 这是高速逆流色谱装置分离柱部分,我们可以清晰的看到螺旋管，自转轴和公转轴 5s * * 而一套完成的高速逆流色谱装置通常需要以下几部分，如计量泵，离心速度控制器，检测器，记录器等。8s * * 这是一整套高速逆流色谱装置图 * * 高速逆流色谱拥有诸多优点，如样品不受污染，溶剂消耗少，粗样可直接上样等。6s * * 目前高速逆流色谱的应用领域已非常广泛，在中药中有效成分的提取，发酵产物纯化，异构体分离以及天然香料分离纯化等许多方面都有应用。10s * * 一个典型的利用高速逆流色谱分离纯化天然产物的过程通常需要经过以下步骤。首先要对原理进行提取精制，与传统的液相色谱法相比较，ＨＳＣＣＣ对样品的预处理要求非常低，仅需简单的提取，甚至不用前处理都可达到很好的分离效果。制备好样品后，需要用高效液相色谱等方法对样品进行分析，测定分配系数值，然后参照文献选取合适的溶剂体系，选择各种工艺参数，进行高速逆流萃取，最后对萃取产物进行纯度和结构的测定。40s * * 溶剂体系的选择对高速逆流色谱非常重要，下表给出了分离不同类型化合物的常用溶剂体系。在之后的实例中我们可以见到 25s * * 下面我们简单了解一下几个用高速逆流色谱分离天然香料的实例。例1为采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂体系，提取木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯。15s 进样100mg木香粗提物进行分离,分离4 h,共洗脱出两个峰。 * * 从100 mg的木香粗提物中分离木香烃内酯34. 6 mg和去氢木香内酯44. 3 mg。 木香粗提物的HPLC分析结果见图2。结果表明,粗提物中包括多种化学成分。其中,最高峰为木香烃内酯,其次为去氢木香内酯。进样100 mg时,分别收集图1 中Ⅰ、Ⅱ峰的流出液,冷冻干燥后称重,采用HPLC法对各成分进行纯度分析。其中,峰Ⅰ为木香烃内