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微生物学实验操作大全.
《微生物学》
实验指导书
目 录
实验一 培养基的配制
实验二 消毒与灭菌
实验三 显微镜油浸系物镜的使用
实验四 细菌形态的观察
实验五 细菌的革兰氏染色
实验六 放线菌的形态观察
实验七 酵母菌的形态观察
实验八 霉菌的形态观察
实验九 细菌数量的测定(设计性实验)
实验十 微生物的接种方法
实验一 培养基的配制
一、实验目的和内容
目的:学习和掌握配置培养基的一般方法和步骤
内容:1、牛肉膏蛋白胨的配制
2、高氏1号培养基的配制
3、马丁氏培养基的配制
二、实验材料和用具
牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/l NaOH、1mol/l HCl、KNO3、NaCl 、K2HPO4*3H2O、MgSO4*7H2O、 FeSO4*7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布
三、操作步骤
(一)牛肉膏蛋白胨培养基的配制
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。其配方如下:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl5g,琼脂15~20g,水1000ml,pH7.4~7.6
1、称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯,牛肉膏极易吸潮,故称量时要迅速。
2、加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入已溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失水分。
3、调pH 检测培养基的pH,若偏酸,可滴加1mol/l NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。若偏碱,则用1mol/l HCl进行调节。PH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不可调过头,以免调回影响培养基内各离子的浓度
4、过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利结果的观察。但是供一般使用的培养基,这步可以省略。
5、分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
6、加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞,棉塞制作方法如图1—1。棉塞的形状、大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。
7、包扎 加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中,则应先把试管扎成捆后,再于棉塞外包一层牛皮纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
8、灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
9、摆斜面 灭菌后,如制斜面,则需趁热将试管口端搁在一根长木条上,并调整斜面,使斜面的长度不超过试管总长的1/2。
10、无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24~48h,无菌生长即可使用。或储存于冰箱或清洁的橱内,备用。
(二)高氏一号培养基的配制
高氏一号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下:
可溶性淀粉20g,KNO3 1g、NaCl 0.5g 、K2HPO4*3H2O 0.5g、MgSO4*7H2O0.5g、 FeSO4*7H2O 0.01g,琼脂15~20g,水1000ml,pH7.4~7.6。
1、称量和溶解 先计算后称量,按用量先称取可溶性淀粉,放入小烧杯中,并用少量冷水将其调成糊状,再加入至少于所需水量的沸水中,继续加热,边加热边搅拌,至其完全溶解。再加入其他成分依次溶解。对微量成分FeSO4*7H2O可先配制成高浓度的储备液再加入,方法是先在100ml中加入1g的FeSO4*7H2O,配成浓度为0.01g/ml的储备液,再在1000ml培养基中加入以上储备液1ml即可。待所有药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基,其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。
2、pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基的配制
(三)马丁氏培养基的配制
马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。其配方如下:
K2HPO41g、MgSO4*7H2O0.5g,蛋白胨
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