微生物学实验操作大全..doc

《微生物学》 实验指导书 目 录 实验一 培养基的配制 实验二 消毒与灭菌 实验三 显微镜油浸系物镜的使用 实验四 细菌形态的观察 实验五 细菌的革兰氏染色 实验六 放线菌的形态观察 实验七 酵母菌的形态观察 实验八 霉菌的形态观察 实验九 细菌数量的测定(设计性实验) 实验十 微生物的接种方法 实验一 培养基的配制 一、实验目的和内容 目的：学习和掌握配置培养基的一般方法和步骤 内容：1、牛肉膏蛋白胨的配制 2、高氏1号培养基的配制 3、马丁氏培养基的配制 二、实验材料和用具 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/l NaOH、1mol/l HCl、KNO3、NaCl 、K2HPO4*3H2O、MgSO4*7H2O、 FeSO4*7H2O。 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布 三、操作步骤 （一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.6 1、称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯，牛肉膏极易吸潮，故称量时要迅速。 2、加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失水分。 3、调pH 检测培养基的pH，若偏酸，可滴加1mol/l NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/l HCl进行调节。PH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不可调过头，以免调回影响培养基内各离子的浓度 4、过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是供一般使用的培养基，这步可以省略。 5、分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。 6、加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞，棉塞制作方法如图1—1。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。 7、包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应先把试管扎成捆后，再于棉塞外包一层牛皮纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 8、灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。 9、摆斜面 灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜面，使斜面的长度不超过试管总长的1/2。 10、无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24~48h，无菌生长即可使用。或储存于冰箱或清洁的橱内，备用。 （二）高氏一号培养基的配制 高氏一号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下： 可溶性淀粉20g，KNO3 1g、NaCl 0.5g 、K2HPO4*3H2O 0.5g、MgSO4*7H2O0.5g、 FeSO4*7H2O 0.01g，琼脂15~20g,水1000ml，pH7.4~7.6。 1、称量和溶解 先计算后称量，按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将其调成糊状，再加入至少于所需水量的沸水中，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶解。再加入其他成分依次溶解。对微量成分FeSO4*7H2O可先配制成高浓度的储备液再加入，方法是先在100ml中加入1g的FeSO4*7H2O，配成浓度为0.01g/ml的储备液，再在1000ml培养基中加入以上储备液1ml即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。 2、pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基的配制 （三）马丁氏培养基的配制 马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。其配方如下： K2HPO41g、MgSO4*7H2O0.5g，蛋白胨