(犬的长期毒性试验.docVIP

试验药物:cpu2013由四川省中药研究所提供，批号961214，每克提取物相当于66.67克。将cpu2013药粉溶于蒸馏水中，按等容积不等浓度配制大、小两个浓度。 1.2　动物:Beagle犬18只，购自军事医学科学院实验动物中心，动物合格证号：医动字第01-3042号，6～8月龄，雌雄各半，体重9.28±0.91kg，分笼饲养观察3周后用于试验。Beagle犬专用膨化饲料购自军事医学科学院实验动物中心饲料厂。 1.3　试剂及仪器:所有试剂均购自北京中生生物工程高技术公司。心电图机为上海医用电子仪器厂产品，型号XDH-3B。电子天平由北京市菲姆斯科技开发公司生产，型号ACS-2EAS，(95)量字京全自动血常规分析仪为日本生产，Sysmex F-820型。全自动血生化分析仪由日本Olympus公司生产，型号AU600。 1.4　剂量及分组:用配对分层随机法按体重分组编号将24只犬分为4组，每组6只，雌雄各半，分别每天给同体积药液或蒸馏水。 1.5　受试环境　中国中医研究院西苑医院实验动物中心，医学实验动物环境设施合格证：京动管犬字(97)第002号。饲料、饮水、垫料均符合《北京市实验动物质量控制标准》。 1.6　实验方法　犬在室温24±3℃条件下，饲养驯化3周适应环境，每日定量摄食300克，每日各组按规定剂量给药1次，一周给药6天。给药前、给药第8周末、第16周末、第24周末、停药2周末各组动物记录心电图，静脉取血检测各项血液学及生化指标。给药24周结束后，各组4只动物记录心电图、取血检测各项指标、活杀进行病理检查。各组剩余的2只动物停药观察2周末记录心电图、取血检测各项血液学及生化指标、活杀进行病理检查。 1.7　观察指标 1.7.1　一般状态观察　每天观察给药后的反应、外观、活动状态精神状态、摄食、饮水、皮毛、呼吸、口眼鼻耳分泌物情况及大小便情况。 1.7.2　体重　 每周测量体重，比较各组差异。 1.7.3　血常规检查指标　 红细胞计数(RBC)、血红蛋白含量(Hb)、白细胞总数加分类(WBC、W-SCR、W-LCR)、血小板总数(PLT)、凝血时间(CT)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(HCHC)、红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)、平均血小板体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)。 1.7.4　血生化指标 　血糖(GLU)、胆固醇(CHOL)、甘油三脂(TG)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、转肽酶(GGT)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、阿法羟丁酸脱氢酶(HBD)、肌酸磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(Cr)、总胆红素(TBil)、血清钙离子浓度(Ca)、血清磷离子浓度(P)。ALT、AST采用IFCC(即国际临床化学联合会)酶法，GGT、LDH、CPK、ALP、HBD、GLU、BUN采用酶法，ALB采用溴甲酚绿法，TP采用双缩尿法，TBil采用重氮法，TG采用GPO-PAP法，Ca采用OCPC法，CHOL采用胆固醇氧化酶法，CRE采用苦味酸 法，P3-采用铜蓝法。 1.7.5　心电图及心率　 用标准Ⅱ导记录心电图。 1.7.6　主要器官的病理检查　 解剖取脑、垂体、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胰腺、胃、十二脂肠、回肠、空肠、子宫、卵巢、前列腺、睾丸、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、脊髓、骨髓、股骨近端、第二腰椎做病理学检查，对各脏器进行测量，计算脏器指数。 2结果 给药24周对犬血生化指标的影响 分组 剂量 (mg/kg) n ALT (u/L) GLU (mmol/L) TG (mmol/L) ALP (u/L) AST (u/L) CHOL (mmol/L) HBD (u/L) 对照组 / 6 37.50 ±8.40 5.34±0.17 0.50±0.06 118 ±38 49.67 ±14.29 3.48±0.69 134 ±30 低剂量 140 6 42.33 ±14.51 4.10±0.86 0.54±0.07 95 ±32 58.83 ±7.88 3.44±0.51 124 ±22 中剂量 794 6 39.915 ±11.4 4.68±0.32 0.52±0.11 124.5±32 55.25±8.73 3.79±0.675 120±33 高剂量 4500 6 34.67 ±14.32 5.29±0.47 0.50±0.18 154 ±30 51.67 ±9.58 4.14±0.84 116 ±44 GGT (u/L) TP (g/L) ALB (g/L) BUN (mmol/L) Cr μmol/L P