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《第一章 生命大分子物质的制备》1、作为现代生化的主要对象的蛋白质、核酸等生物大分子有何特点？ （1）成分复杂：生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。有的生物大分子在分离过程中还在不断的代谢，所以生物大分子的分离纯化方法差别极大，想找到一种适合各种生物大分子分离制备的标准方法是不可能的。 （2）含量甚微：许多生物大分子在生物材料中的含量极微，只有万分之一、几十万分之一，甚至几百万分之一。分离纯化的步骤繁多，流程又长，有的目的产物要经过十几步、几十步的操作才能达到所需纯度的要求。 （3）易变性易被破坏：许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物大分子提取制备最困难之处。过酸、过碱、高温、剧烈的搅拌、强辐射及本身的自溶等都会使生物大分子变性而失活，所以分离纯化时一定要选用最适宜的环境和条件。 （4）具经验性：生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、pH值、离子强度等各种参数对溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断，因而实验结果常有很大的经验成份，实验的重复性较差，个人的实验技术水平和经验对实验结果会有较大的影响。 （5）均一性的相对性：生物大分子制备物的均一性（即纯度）的鉴定，通常只采用一种方法是不够的，必须同时采用2～3种不同的纯度鉴定法才能确定。 2、生物物质方案的设计基本原则是什么？ 在方法的选择上，宜选择粗放、分辨率低、快速、有利于缩小样品体积和减少后工序的方法宜选择精确、分辨率高、需样品少的方法。 在安排各种分离纯化方法的使用程序时应注意：（1）不适宜连续使用同一种分离纯化方法，应该交叉使用，因为每一步分离后，性质相似的物质聚在一块；（2）使用顺序还要考虑到有利于减少工序、提高效率。 、综合评价生物物质步骤方法的好坏应从哪些方面进行？ 每一个步骤方法的好坏，除了从分辨本领和重现性二方面考虑外，还注意方法本身的回收率和纯化倍数，特别是制备某些含量很少的物质时，回收率的高低十分重要。因此综合评价试验方案的优劣应从分辨本领、重现性、回收率和纯化倍数等方面进行。 一个好的应该使纯化倍数和收得率都同时有较大提高。但在实际过程中，随纯化倍数的提高，收得率是逐渐降低的。因此应该根据材料的来源难易（难——收得率优先考虑，易——纯化倍数优先考虑）和制备物的目的等方面来综合评定方法的优劣。 、提取生物活性物质时，活性保护性措施有哪些？ 提取一些具有生理活性的物质时，除了考虑被提取物溶解度外，还应考虑被提取物活性的保护。对于一些生物大分子如蛋白质、酶和核酸来说，主要措施有如下几点：（1）采用缓冲系统；（2）加入保护剂；（3）抑制水解酶的破坏；（4）其它一些特殊要求的保护措施。 、蛋白质、DNA和RNA的常用提取方法有哪些？ （1）蛋白质和酶的提取方法：水溶液提取、、有机溶剂提取 （2）DNA的提取方法：浓盐法、、阴离子去污剂法、苯酚抽提法、水抽提法 （3）RNA的提取方法：苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。 胰岛素可溶于稀酸、稀碱和稀醇溶液，但在组织中与其共存的糜蛋白酶对胰岛素有极高的水解活性，采用68％乙醇溶液（用草酸调溶液的pH为2.5～3.0）进行提取，可以从下面三个方面抑制了糜蛋白酶的水解活性： ①68％的乙醇可以使糜蛋白酶暂时失活； ②草酸可以除去激活糜蛋白酶的Ca++； ③选用pH2.5～3.0，是糜蛋白酶不宜作用的pH值。 《第章 》Lane-Eynon）法、斐林试剂快速法（GB法）、碘量法、铜试剂法 3、核酸的化学检测方法主要有哪些？ 定磷法、二苯胺法和地衣酚法 4、？ 5、放射自显影技术的基本原理是什么？ 其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。然后经过显影、定影处理显示还原的黑色银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量。 6. 生物检测内容主要有哪些？安全性检测包括哪些内容？ 生物检测内容主要包括生物效价测定和安全性试验。安全性检测主要包括毒性试验、局部刺激性试验、溶血实验、热原试验、过敏试验和变异原试验。 7. 核磁共振在生物学研究中主要有哪些方面的应用？ (1)分析研究?：如确定生物分子成分及浓度，特别是可不破坏组织细胞而测知其中组分；确定异构体比例；确定分子解离状态；确定金属离子或配基是否处于结合状态；以及测定细胞膜内外的pH差异。 (2)热力学研究：如测定酶与底物、配基、抑制剂的结合常数；测定可解离基团的pK值，特别是能测定生物大分子中分处不同微环境的同类残基的同类基团的不同pK值，这是其他方法所不及的；还可测定相变温度，ΔG等其他热力学参数。 (3) 动力学研究：监测