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2011 现代生物技术期末试卷 一 填空题 1 在基因工程实践中，常用的载体有（质粒 ）， （噬菌体 ）和（腺病毒载体） 质粒是细菌染色体外能够自主复制的环形双链的DNA分子。质粒DNA不仅能在细菌中复制，并且在添加真核复制信号和启动子后，可以构建出能在原核和真核细胞中均可复制的穿梭质粒，并在真核细胞中表达， 载体的特点： 1、 至少有一个复制起点，因而至少可在一种生物体中自主复制。 2、?至少应有一个克隆位点，以供外源DNA插入。 3、?至少应有一个遗传标记基因，以指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞。4、具有较小的分子量和较高的拷贝数。 2 （ 限制性内切酶 ）酶和（ DNA连接酶 ）酶的发现和应用，才真正使DNA分子的体外切割与连接成为可能。 3 根据质粒复制控制类型，可将质粒分为（严紧型质粒1）. 普通型载体，2）、表达型载体. 表达外源基因以产生大量外源基因产物 用于构建cDNA文库 4 1993年美国科学家（ Kary Mullis ）因发明PCR技术而获得诺贝尔奖。 5 一切生物生命活动的结构和功能单位是（ 细胞 ），其可分为（ ）和（ ）两大类 细胞分裂的方式: 无丝:最简单的细胞分裂方式,只出现在低等生物或动植物的器官和组织内 有丝:是细胞分裂的主要形式,其实质是染色体经过复制变成双份,再平均分配到两个子细胞中,从而保持遗传物质的稳定传递.有丝分裂过程包括间期,前期,中期,后期和末期. 细胞的分裂是通过细胞周期来实现的。 S期，DNA合成的时期. 从S期到有丝分裂期(M期)为G2期 从MS期开始之前称为G1期. 6 人工种子由（ 种皮 ）、（ 胚乳 ） 和（ 胚 ）三部分构成。 7动物细胞常用的培养方法有（贴壁培养悬浮培养固定化培养“溶解”状态； 不同生物体细胞内酶的数量和种类不同；同一生物体内的不同部位或不同生长发育阶段的细胞内酶的数量、种类不同； 微生物酶来说，合成后分泌有两种情况：胞外酶（分泌型酶）是指可以穿过质膜的任何酶，大多数是水解酶，大多数工业用酶是胞外酶。胞内酶 是指合成后仍然在细胞内发挥作用的酶。 酶系统分类命名的基础是酶的专一性： 酶活力：是指酶催化一定化学反应的能力。U/ml，U/g 主要产酶菌: 大肠杆菌, 枯草杆菌,啤酒酵母, 曲酶（黑曲酶和黄曲酶）： 酶的发酵生产: 是在人为条件控制下，有目的地利用微生物产生酶。其过程包括：1种子准备；2培养基配制：其组分一般包括碳源、氮源、无机盐和生长因素等几个方面。3选用合适的培养方法以及发酵过程中各种条件的 控制管理等几方面。 提高酶产量的方法: 条件控制：发酵条件优化。遗传控制：包括基因突变和基因重组。 酶的提取纯化全过程包括三个基本环节：预处理、提取纯化、制剂 固定酶：通过化学或物理手段处理，将酶束缚在一定的空间内 ，限制酶分子在此区间进行活跃的催化作用，成为不溶于水的固定化的酶或细胞。 固定化酶(细胞)的制备方法: 吸附法 包埋法 共价结合法 共价交联法 固定化细胞是指直接将细胞固定在水不溶性载体上，在一定的空间范围内进行生命活动（生长、繁殖和新陈代谢）的细胞。性质: 有一定的机械强度且稳定性好，催化剂与系统分相。固定化酶在使用前可充分洗涤，不带进杂质，在反应中酶与产物自然分开，所以产物易提纯，回收率也高。可较长期使用与储藏，并可以再生。能反复使用，可大大降低生产成本 酶的局限性：1、作为异体蛋白在体内难于吸收、易引起免疫反应和被 识别降解； 酶工程主要有以下几方面的内容: 1）化学修饰（一级结构改造）：对酶分子的侧链基团、 酶活性中心中的必需基团进行化学修饰，改造酶性能、研究酶结构与功能的关系。原理：通过化学基团的引入或除去而使酶蛋白共价结构发生改变。最常用的修饰剂——PEG类修饰剂（聚乙二醇） 修饰方法：1. 酶的表面化学修饰2.酶分子内部修饰 3.结合定点突变的化学修饰 变性、诱导与构象重建（高级结构调整） 蛋白质工程（基因水平定位突变）：蛋白质工程的主要方法：化学全合成法 ; 限制性内切核酸酶酶切片段取代法;寡核苷酸引物指导的定点突变 人工合成新酶：模拟酶;核酸酶;抗体酶 4）固定化酶：通过对酶分之内或分之间的交联，或与水 不容性载体的结合制成，催化特定的反应。 5）模拟酶：用化学方法合成新的有机催化剂，使其具有酶活性。 9 （蛋白质工程 ） 又称为第二代基因工程。 二 判断题 1 所有的酶都是蛋白质 （×） 2 固定化酶的一个缺点是不如溶剂酶稳定（×） 3 就已有文献资料来看，核酶（RIBOZYME）符合催化剂概念。（　√　）