(堵杰开题报告2.docVIP

开题报告： 放射自显影法测定中药对小鼠整体作用谱研究 摘要: 目的: 研究不同中药对小鼠器官组织机能影响的差异 方法：选用10味具有寒热药性没有异议的常用中药，粉碎成80目细粉，制备成混悬液，以临床常用量的上限按体表面积折算成小鼠用量，给小鼠灌胃。采用14C－2－脱氧葡萄糖代谢放射自显影等方法研究10味中药在单次用药1小时后不同性味的中药对各器官组织机能的影响。结论：不同寒热药性的中药之间不只是作用程度的量的差别，还包含有作用于不同器官组织的质的区分。 关键词：放射自显影术；小鼠整体薄切片；寒热中药；作用谱 研究背景 放射自显影术 放射自显影术(ARG)是目前核医学在应用研究当中最具前景的领域之一。 它对探讨疾病的发病机制[1]、诊断和新药开发，研究中药药性[2-4]提供了重要的理论依据和技术平台。 各类物质（如药物 营养成分、毒物等）在细胞、组织或生物体内经常处于吸收、渗透、合成、转移、分解和排除的动态过程，存在于不断更新与动态平衡之中[5]。运用放射自显影术，不仅能准确地测定体内代谢物质的转运和转化，而且可以确切地标示出在组织器官中不同水平的定位，尤其设计和运用放射自显影的不同水平示踪术，可以观察在整体水平的、脏器水平的、细胞水平的和亚细胞水平或分子水平的定位研究[6]，并可与不同水平的组织结构改变联系起来观察。 葡萄糖代谢放射自显影 。。。。。 本课题的主要贡献在于：以整体10μm切片和放射自显影术为主要技术平台，建立能够描述小鼠整体器官、组织、细胞各水平糖代谢变化的方法，称之为小鼠整体薄切片放射自显影术的方法。 2文献综述20世纪发展起来的一门新兴交叉学科是毫无疑问的。一般认为,1923 年,G. Hevesy 把同位素示踪技术用于生物学中是核医学史上的一个要里程碑[9]。放射性同位素在示踪技术方面的应用，是核技术应用的一个重要组成部分。放射自显影术不但具有能在形态学的基础上观察机能变化的特点，而且还具有定位精确，灵敏度高、操作简单、可供定量和双核素示踪等优点。所以，在近代医学生物各门学科，尤其药理学中的应用占有十分重要地位。放射自显影术将要追踪的药物用放射性核素标记后，经不同途径将示踪物引入体内或作离体掺入等方法，研究生理或病理状态下各种放射性核素标记在机体、组织、细胞中的分布、定位等动态过程中的规律，以分析其合成、更新、排出、蓄积， 作用部位来阐明药物的作用机理，为合理用药提供实验数据，并可使其研究达到亚细胞水平及分子水平，以图像形式表达其生理功能。如研究，对铀有明显的解毒和促排效果的双酚胺酸时，张建时等应用了整体放射自显影术和微光密度法对双酚胺酸进行了定位、定量和分布的观察（10）。 2.2放射自显影术中用到的几种组织切片方法的种类和优缺点 2.2.1 冰冻切片法： 是最常用的一种切片方法。其最突出的优点是石蜡切片为常规制片技术其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究中有较大的实用价值，能切连续薄片，组织结构清晰。塑料包埋切片常用包埋剂有甲基丙烯酸盐类（Glycol methacrylate, GMA）环氧树脂类（Epon 812,618）其优点是可以同时作光镜和电镜检测，塑料包埋切片可切出比石蜡切片更薄的切片，光镜切片可薄至0.5～2μm，故称半薄切片（Semithin section）。0.1 ml/10 g体重）蒸馏水。 3．3 同位素引入 给予中药后1h，所有小鼠(包括空白对照组)尾静脉注射14C一脱氧葡萄糖l2．5 p,Ci／kg(体重)。2 h后，乌拉坦5g/kg处死动物，一80℃速冻。整体冷冻切片10μm，把整体切片置于载玻片上，贴上写好编号的14C－2－脱氧葡萄糖标准梯度放射源，－20℃保存。 3．4 放射自显影 在上述载玻片滴上7.5%PPO二甲苯溶液，将涂完核乳胶的盖玻片覆盖于载玻片上，置4℃冰箱中进行高速放射自显影24小时。 3．5 显影、定影 3．6 苏木素-伊红染色 3．7 数据采集 数码相机拍摄整体组织切片及自显影图片。通过在整体组织切片上各组织、器官、细胞的位置，确定相应自显影图片上各组织、器官、细胞的位置，利用PHOTOSHOP软件，获取其影像的平均发光度。 3．8 数据处理及统计 可行性分析 4．1 理论方面：近一个世纪的中药现代化研究积累已证明中药对机体有广泛作用，因此动物口服后，总可以得到中药对动物各组织、器官、细胞影响的结果。中药的广泛作用可以表现为，在中药干预下机体各组织、器官、细胞对能量需求的变化。通过放射自显影方法，比较正常组与各用药组对14C－2－脱氧葡萄糖摄入的改变，来了解器官、组织、细胞的这种机能变化。这种方法有利于研究中药性味归经等作用影响机体信息传递的部位及可能的机制。 ⑵ 技术方面：本课题通过改进、整合现有