FQPCR临床应用解读__培训课件.pptx

Clinical Application Interpretation of the Fluorescence Quantitative PCR荧光定量PCR临床应用解读许泼实内容提要一、FQ-PCR技术简介二、乙型肝炎的病原检测三、丙型肝炎的病原检测四、性病相关病原体的检测五、其他分子生物学项目荧光定量PCR技术细胞膜基因诊断与PCR细胞核DNA基因诊断：通过核酸的分子生物学检测直接检测基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断。PCR是一种DNA的快速扩增技术，它通过两个引物片段和一种耐热酶，可在短时间内把特定的DNA片段扩增1000万倍。 80年代发明PCR，90年代中期PCR临床应用在国内全面开展，98年荧光定量PCR技术开始应用于临床检测。4 基因诊断转录 mRNA翻译蛋白质3 免疫学诊断2 生化诊断1 形态学诊断荧光定量PCR技术指在反应体系中加入荧光标记，利用荧光信号积累实时监测整个PCR过程，通过标准曲线对PCR终产物的分析，实现对未知起始模版进行定性和定量的一种技术。“荧光共振能量转移”系列标准品所做出来的标准曲线达到阈值时的循环数浓度对数荧光定量PCR技术的优点特异性强：直接扩增病原体的特异DNA或异常基因片段灵敏度高：可检测到极少量的DNA，有效降低漏诊率显著缩短病原体检出窗口期高效省时：扩增周期短，有利于快速诊断定量准确：利用标准曲线法，采用对数期分析取材范围广：血清、痰液、体液、毛发等多种样本全封闭反应：无需PCR后处理，降低污染自动化程度高：操作安全，避免人为判断缩短病原体检测 “窗口期”　FQ-PCR检测“窗口期”核酸检测“窗口期”缩短天数HBV45-561036-47HCV721259HIV221111有效减少窗口期漏检，避免“被医院感染”检出免疫学方法尚无能为力的免疫静默感染、乙肝隐匿性感染、病毒变异株感染等提高献血员窗口期筛查检出率，降低输血传播病毒风险，进一步保障用血安全鉴定职业暴露源的传染性及被暴露者的监测周期我国ELISA漏检远高于国外为什么？国家或地区HBVHCVHIV加拿大1:15300017800000法国1:6400001:100000001:3150000德国1:2300001:6700001:2770000日本1:519881:3480911:2668696美国1:1800001:2300001:1300000中国1：42781：406481：81296荧光定量PCR技术的临床应用病毒性肝炎（HBV、HBV-YMDD、HCV）性病相关病原体（CT、NG、UU、HPV、HIV、TP）优生优育相关项目：HCMV、HSV-Ⅱ、TOX、RV其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、伤寒杆菌、幽门螺旋杆菌等如何看FQ-PCR测定报告定量--测定的是量的“多”或“少”；定性--则是测定某种物质的“有”或“无”，用于未知病人的确认诊断。定量测定报告：反映被检标本中病毒DNA/RNA存在的多少；“copies/ml”表示每毫升血清中病毒基因组的拷贝数，该数据越大，表明病毒在人体内的复制越活跃。例如“HBV DNA=4.3×103 copies/ml” 代表每毫升血清中有4300个乙肝病毒“10n”：n越大，表示含量越高。“＜1.0×103 copies/ml”—有没有HBV感染？ ------结合其他指标判断乙型肝炎病毒检测乙型肝炎病毒结构及特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，　一般不存在于血循环中HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM　提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好HBV感染细胞的过程HBV侵入肝细胞后，部分双链环状HBV DNA在细胞核内以负链DNA为模板延长正链以修补正链中的裂隙区，形成共价闭合环状DNA (cccDNA)；然后以cccDNA为模板，转录成几种不同长度的mRNA，分别作为前基因组RNA和编码HBV的各种抗原； cccDNA半寿 (衰) 期较长，很难从体内彻底清除，病毒DNA可发生整合……重组乙肝疫苗(Hepatitis B vaccines, HepB)和HBIG联合应用可有效降低HBsAg阳性母亲所生婴儿及儿童的HBV感染率，对HBV感染高危儿的保护作用可达90%以上。乙型肝炎诊断临床诊断 既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月，现HBsAg和（或）HBV-DNA仍为阳性者，可诊断为慢性HBV感染。可分为： 慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、携带者、隐匿性慢性乙型肝炎实验室诊断 ? 生物化学检查：ALT、AST、血清白蛋白、PT、胆碱酯酶、AFP ? 血清学检查：乙肝蛋白标志物 ? HBV-DNA、基因型和变