基因诊断肝炎__培训课件.pptVIP

乙型肝炎 基因诊断 乙型肝炎 病例 颜先生，男，47岁，在一家大公司任公关部经理。近两个月感觉乏力、纳差，每次应酬都不胜酒力。20天前皮肤及巩膜开始发黄。 到医院检查肝功能显示谷丙转氨酶、谷草转氨酶增高，总胆红素、间接胆红素增高，乙肝表面抗原阳性。 诊断为 乙型肝炎 公司同事知道颜先生患乙肝后，都对其敬而远之，午餐时颜先生总是形单影只，独自闷头吃饭，与以往呼朋唤友的情形反差甚大。 常规检查 基因诊断优势 乙肝病毒基因组结构 基因诊断技术 基本技术 重点技术 乙型肝炎 基因诊断 乙型肝炎 常规检查 乙肝（乙型病毒性肝炎）五项检查 乙肝（乙型病毒性肝炎）病毒DNA检测 肝功能检查 B超 甲胎蛋白(AFP) 乙型肝炎 基因诊断优势 目前研究发现，许多表面抗原阴性的异型乙肝并不少见，不少乙肝患者虽然只表现为抗体（如核心抗体，e抗体等）为阳性，但是肝功能反复异常，进一步检查乙肝病毒DNA往往为阳性，这些人也是乙肝现症感染者。 基因诊断是通过较为先进的检测技术（例如聚合酶链反应）检测出体内极其微量的乙肝病毒DNA基因，是一种新的检验方法。乙肝病毒DNA是乙肝病毒复制的发动机。 乙型肝炎 基因组结构 双链缺口环型DNA，约3.2kb，分为正、负链。 负链为长链，长度固定；正链为短链，长度可变。在粘性末端各有11bp组成的直接重复（DR）序列，分为DR1和DR2区。 乙肝病毒基因组DNA有四个开放读码框架（ORFs），分别为S、C、P和X区，其中P区分别与S、C和X区相互重叠。 乙型肝炎 基本技术 斑点杂交 原位杂交 DNA印迹和RNA印迹杂交技术 核酸电泳 聚合酶链式反应（PCR） 基因芯片 核酸杂交 乙型肝炎 重点技术 聚合酶链式反应 反向斑点杂交 生物芯片技术 海量PPT模板免费下载 乙型肝炎 重点技术之一 PCR扩增HBV 基因特征序列检测乙肝病毒DNA PCR扩增HBV基因特征序列 检测乙肝病毒DNA 聚合酶链式反应（PCR）作为一种简便高效的基因扩增技术，具有极高的检测灵敏度和特异性，通过扩增并检测HBV DNA保守区的一段特殊序列而达到对乙肝病毒的检测目的。 相对于常规的PCR检测方法，荧光定量PCR克服了假阳性缺点，能对HBV-DNA实时定量测定。 PCR检测中的要点 引物是决定PCR产物是否特异，反应能否成功进行的关键。设计引物有如下原则 乙型肝炎 重点技术之一 MD24,MD26的介绍： 以上引物为X基因中最保守的序列，该引物分别位于乙肝病毒基因组的1400~1423和1627~1610位，扩增产物长度为227bp 乙型肝炎 重点技术之一 荧光定量PCR原理示意图 乙型肝炎 重点技术之一 反向斑点杂交（RDB）法 乙型肝炎 重点技术之二 反向斑点杂交（RDB）具有快速、简便、高敏感性、特意性强的特点，尤其是基因分型、基因突变检测，病原体的检测等方面有其独特的优势。 本次实验的基本原理是通过PCR扩增将DIG-11-dUTP掺入目的产物，将PCR产物变性后与固定在膜上的寡核苷酸探针进行杂交，然后通过酶免疫显色法获取结果。 乙型肝炎 重点技术之二 RDB检测乙型肝炎病毒(HBV) 基本核心启动子区A1762T/G1764A突变 A1762T/G1764A是位于X基因上的位点突变，核苷酸1762位上的腺嘌呤转换成了胸腺嘧啶，A-T突变；1764位上的鸟嘌呤转换成了腺嘌呤，G-A突变。 实验步骤： 1、确定检测对象 5例A1762/G1764病毒株血清 2例T1762/G1764病毒株血清 5例A1762/A1764病毒株血清 4例T1762/A1764病毒株血清 2、引物、探针设计与合成 3、检测阵列制备，手工点样 探针点样区域 4、PCR扩增 5、杂交、洗膜和显色 结果： 生物芯片根据检测对象分为：基因芯片和蛋白质芯片 优点： 缩短肝炎病毒感染窗口期，减少漏检和误检。 耗血量少，多指标检测更简便更高效。 生物芯片技术采用最先进的技术，准确性好。 生物芯片技术 乙型肝炎 重点技术之三 大量特定的核酸片段或蛋白质有序固定在载体上 与待检核酸或蛋白质分子进行反应 检测光信号的强弱并判断样本中的靶分子数量 乙型肝炎 重点技术之三 生物芯片技术 乙型肝炎 重点技术之三 基因芯片原理图 基因芯片用于 乙肝病毒的耐药性突变检测