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2.分离培养将标本葡萄糖肉汤增菌培养液,直接接终于血琼脂平板、巧克力琼脂平板,置于5%-10%CO2环境中,35℃培养18-24小时后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1-2mm的小菌落,经涂片证实为革兰阴性双球菌,并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。 电镜下脑膜炎奈瑟菌 血琼脂平皿上的脑膜炎球菌菌落 3.鉴定 该菌鉴定主要通过氧化酶、糖类发酵和血清学等试验以及培养生长特点进行。 ①细菌染色形态; ②氧化酶试验阳性; ③触酶试验阳性;④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气; ⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验。 4.结果评价和报告 重视脑脊液和瘀点穿刺物的直接镜检,这是最快速确证脑膜炎奈瑟菌的简便方法。 直接镜检为革兰染色阴性双球菌,可初报,经分离培养后见菌落特征典型、生化反应能力弱,只分解葡萄糖、麦芽糖、产生少量酸,氧化酶试验阳性,可报“检出脑膜炎耐瑟菌”。快速乳胶凝集试验阳性。 药物和疫苗预防对于降低流行性脑脊髓膜炎发病率,控制流行性脑脊髓膜炎的流行是安全和有效的,带菌者或易感人群,可用青霉素,利福平,米诺环素进行药物预防,或应用含有A,C,Y,W-135血清型的四价疫苗接种进行免疫预防。 脑膜炎奈瑟菌是一种革兰阴性的双球菌,仅在人类中传播,根据多糖胶囊结构,可分成 12 种血清群( A、B、C、29E、H、I、K、L、W135、X、Y 以及 Z) 。根据 1 级外膜蛋白( PorA) 、2 级或 3 级( PorB) 外膜蛋白以及脂肪多糖结构可进一步分类。 脑膜炎奈瑟氏菌表面蛋白NsPA基因的克隆与原核表达硕士学位论文 脑膜炎奈瑟菌的抗原结构与分类主要分有四种。 1.荚膜多糖群特异性抗原 荚膜多糖群特异性抗原已分成A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135和L等10个血清群。建立了H、I、K三个新血清群,故总计13个血清群,其中以C群致病力最强 2.外膜蛋白型特异性抗原 外膜蛋白型特异性抗原根据菌外膜蛋白组分不同,脑膜炎奈瑟菌各血清群又可分为若干血清型,但A群除外,其所有菌株的外膜蛋白相同。 3.脂多糖抗原 脂多糖抗原与大肠埃希菌间有交叉反应。 4.核蛋白抗原 核蛋白抗原无特异性,与肺炎链球菌者相同。 免疫检验:利用免疫学技术检查患儿脑脊液、血、尿中细菌抗原为快速确定病原菌的特异方法。特别是脑脊液抗原检测最重要。 放射免疫法: 用荧光素标记已知抗体,再加入待检抗原(如脑脊液、血液标本),然后用荧光显微镜观察抗原抗体反应。此法特异性高、敏感性强,可快速作出诊断,但需一定设备。 酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验检测A群抗原的灵敏度较反向间接血凝试验为高。 对流免疫电泳(coumter-immunoec trophoresis,CIE): 此法系以已知抗体(特定的抗血清)检测脑脊液中的抗原(如可溶性荚膜多糖。特异性高,常用作流脑快速诊断,也用以检查流感杆菌、肺炎链球菌等,阳性率可达70%~80%。 凝集实验: 乳胶凝集试验阳性率为85%~93%,协同凝集试验检测A群及C群的阳性率亦较高反向间接血凝试验的阳性率为94.2%(脑脊液)及78.8%(血液) 抗体检测不能作为早期诊断方法且敏感性与特异性均较差,故临床应用日渐减少。对流免疫电泳法放射免疫测定法、间接血凝试验,如恢复期血清效价大于急性期4倍以上则有诊断价值。 脑膜炎双球菌 的R IA 检测及其分型 -----放 射 免疫 学 杂志 9 9 年 第 卷 第7 期 侵袭性脑膜炎双球菌性疾病诊断标准是从正常无菌体液,包括血液或脑脊液,或皮肤瘀点检出脑膜炎奈瑟菌。因为脑膜炎双球菌是鼻咽部携带的正常菌群,因此这些部位分离到脑膜炎双球菌不能证实 IMD 的临床诊断。当使用抗生素治疗后,血培养脑膜炎双球菌的分离率从 50%下降到 <5%,脑脊液培养或镜检阳性率也迅速下降; 快速PCR 检测可作为标准实验室检测程序的补充,运用也越来越多。 中华传染 病 杂志1 9 94年1 1月 第12卷第4期 点击添加标题 腺苷脱氨酶(ADA)检测 降钙素原(PCT) CRP p2一m、SF、LDH、CK 研究性指标 腺苷脱氨酶(ADA)检测 本组资料中 30例结核性脑膜炎患者 ADA显著高于其他组别 ,提示 ADA活力测定对结核性脑膜炎的诊断有价值;病毒性脑膜炎组和头痛症状组无一例 8U/L,以大于该值为判断值,就可以很好地与后两组疾病 区别开来 。但结核性脑膜炎组与化脓性脑膜炎组鉴别则还有一定的困难 ,30例结核性脑膜炎患者ADA测定值中最低为 3.1U/L。最高为 31.6U/L,其中有 24例 8U/L,6例 8U/L,而化脓性脑膜炎组也有 6例 8U/L。28例 8U/L。以 ADA8U/L为阳性 阈值 ,诊断结核性脑膜炎 的敏感性为 80.O%,特异性为
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