电镜练习题及参考答案.doc

一、电镜练习题及答案 一、透射电镜标本取材的取材的基本要求 组织从生物活体取下以后，如果不立即进行处理，此外，污染，细胞的结构遭受破坏。因此，为了使细胞结构尽可能保持生前状态，取材操作注意 (1)．动作迅速，组织从活体取下后应在最短时间 (争取在1～分钟内)投入固定液。(2)．固定剂渗透能力较弱，组织块如果太大，块的内部将不能得到良好的固定。所取组织的体积要小，一般不超过1mm。为便于定向，可将组织修成大小1mm×1mm×2mm长条形。 ()．酶操作最好在低温(～进行，防止细胞自溶(5℃）中存放一段时间。 (4)．操作，避免牵拉、挫伤与挤压。 光镜的照明源是可见光，而电镜是用电子束照明。光镜的透镜用玻璃制成，电镜的透镜是轴对称的电场或磁场。——漂洗（生理盐水）——前固定（2.5%戊二醛，4oC冰箱2小时以上）——漂洗（0.1M 磷酸缓冲液，3次，45分钟）——后固定(1%锇酸1小时左右)——漂洗（0.1M 磷酸缓冲液，3次，45分钟）——块染（1%醋酸铀2小时）——梯度脱水（50%、70%、80%、90%丙酮各15分钟， 100%丙酮 2次，各10分钟）——浸透（丙酮：包埋液=1：1，37 oC烘箱2小时；丙酮：包埋液=1：4， 37oC烘箱过夜；纯包埋液45oC烘箱2小时）——包埋聚合（45oC烘箱3小时，65oC烘箱48小时）。 2、扫描电镜样品制作流程为取材（做好样品观察面的标志）——漂洗（生理盐水或缓冲液）——固定（2.5%戊二醛2小时以上）——漂洗（0.1M磷酸缓冲液，3次，45分钟）——后固定（1%锇酸，2小时）——脱水（ 50%、70%、80%、90%、95%各15分钟，换醋酸异戊酯15分钟或叔丁醇15分钟）——干燥（零界点干燥或冷冻干燥）——镀膜（真空镀膜仪或离子溅射仪） 四、常用的化学固定方法有哪些？ 答;常用的化学固定方法有 1、浸泡固定法（也称组织块固定：。游离细胞固定适用于培养细胞、周围血、骨髓、胸腹水或其他渗出液。如为贴壁生长的培养细胞，应先用橡皮刮子将细胞从培养管壁上轻轻刮下，或用酶消化，使细胞脱离管壁灌注固定法 通常采用的固定剂为2%～4%戊二醛溶液或者4%多聚甲醛溶液。透射电镜由部分组成，即镜筒、真空系统电源和。机械泵、油扩散泵、真空管道、阀门及检测系统组成。主要的电源供给包括高压电源、电子枪灯丝电源、控制极电源、透镜电源、真空系统电源等部分。 答: 电镜在生命科学上的应用几乎包括所有的学科研究领域都已经用到或即将用到电镜技术。比如动物或植物细胞的超微结构（包括细胞核、细胞质及其细胞器等内容物、细胞间的连接等）的形态观察，通过对比观察，对动植物形态在超微结构水平上进行分类、分型，以探讨遗传、变异及病理病因的机理或机制，为生命科学的基础研究所不可或缺的研究手段。 利用常规电镜技术和特殊电镜技术如免疫电镜技术、电镜酶细胞化学技术、电镜原位杂交技术等可以进行细胞细胞超微结构及超微病理分析，以及细胞内抗原、酶等的定位、定性甚至定量研究等。 七、简述电镜的球差和畸变及其形成原因。 答：1、球差：由于电子束光源通过透镜受到偏转，通过样品，从物平面向下发射，形成物点孔径角。从物点发出的射线，到达下一级透镜又被聚集。如果透镜有缺陷或孔径角太大，则靠近光轴的射线和远离光轴的射线，受到电磁场的作用就会不同，这些射线在光轴上会聚的位置不同，结果远离光轴的射线就会在像面上形成一个最小模糊圈。此时可有图象中央凸起感。球差是目前影响电镜分辨率的一个主要因素。 2、畸变：由于离轴较远处的径向磁场的作用力强，使放大倍数随物点离轴的距离而变化，进而使图象发生改变而产生的。畸变常见的有枕形畸变、桶形畸变和S形畸变等。 八、简述电磁透镜及其聚焦原理 答：由于轴对称弯曲磁场对电子束有聚焦作用，因而可以得到电子光学像。我们称这种具有轴对称弯曲磁场装置构成的电子透镜为电磁透镜（electron magnetic lenses）。由于电磁透镜磁场非均匀分布，物、像点在磁场之外，电子在磁场中既受到轴向分量的作用，又受到径向分量的作用，使平行于轴进入磁场的电子束可获得聚焦。 九、什么是反差？简述电镜荧光图像反差形成的原因。 答：1、人的眼睛在区分物体时，主要根据物体不同部位或物体之间的光强度与波长的差别，这些差别构成了物体的反衬度，又称为“反差”。电镜与光镜一样也存在反差现象。 2、由于电镜标本上的不同部位的物质结构不同，经过电子染色后，其疏密度也不同，它们散射电子的能力也各不相同，散射电子能力强的地方，显现为暗像；相反，散射能力弱的地方，显现为亮像。因此，在荧光屏上所看到的是由暗像与亮像组成的具有一定反差的荧光图像。 十、游离细胞取材方法有哪些?并简述其处理方法。 答：血浆凝集法：将抗凝全血离心分层（