分子诊断学新.doc

下划线代表的是增加的重点，倾斜代表暂时可以不看的内容 第一章 绪论 分子诊断学：是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子的和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供信息和依据。 个体化医疗：是指针对可能影响患者治疗效果的的个体因素和环境因素，做出适合不同患者的最佳处理和治疗方案。 第二章 基因与基因组 基因 ——DNA分子中含有特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。合成有功能的多肽链或RNA所必需的全部核酸序列（通常是DNA序列）。 基因组：广义：一物种的全部遗传物质及其携带的遗传信息。 狭义：单倍体细胞中的全套染色体（人：22条常染色体 + X，Y + 线粒体DNA） 断裂基因：基因的编码序列在DNA上不是连续的，而是被不编码的序列隔开。 重叠基因：基因组DNA中某些序列被两个或两个以上的基因所共用。基因重叠现象在病毒基因组中普遍存在。 跳跃基因：即转座子，在哺乳动物体内一般含有几十万个跳跃基因DNA； 基因家族指核苷酸序列或编码产物的结构具有一定程度同源性的一组基因 假基因（pseudogene): 在多基因家族中有的成员并不能表达出有功能的产物，用ψ表示。 SNP：单核苷酸多态性指单个核苷酸变异而形成的DNA分子多态 质粒：细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子 转座因子又称转座元件（transposable element），是一类在细菌染色体、质粒或噬菌体之间自行移动并具有转位特性的独立的DNA序列 微卫星：广泛分布在原核和真核生物基因组中，常出现在基因的非编码区和染色体末端，重复序列长度仅为1—6bp，呈串联重复排列。 黏性末端:对于双链DNA病毒而言，基因组双链两端具有能够互补的单链DNA部分，称为粘性末端 原核生物基因组的特点1.原核生物基因组：DNA原核生物基因组DNA较小,基因数目较少原核生物基因组中只有一个DNA复制起点;2原核生物的操纵子结构;操纵子结构是原核生物基因组的功能单位, 原核生物的结构基因大多数按功能相关性成簇地串联排列于染色体上;3.原核生物的结构基因多数是单拷贝基因，只有编码rRNA和tRNA的基因有多个拷贝;4原核生物结构基因的编码顺序一般不重叠;5.具有编码同工酶的不同基因6.GC含量差异大7.非编码区内主要是一些调控序列;8.具有可移动的DNA序列 病毒基因组的结构与功能特征: 1、帽子和poly(A)结构：帽子：1）对病毒基因组正链RNA具有保护作用，可以使病毒正链RNA或mRNA免受宿主细胞中的外切核酸酶的降解；2）病毒基因组RNA的帽子结构还与感染性有关，缺少它几乎完全丧失感染性； 尾；保持和提高病毒基因组RNA在宿主细胞中的稳定性； 与病毒的侵染性有关 粘性末端； 末端正向重复序列； 4、末端反向重复序列 5、重叠基因 6、分段基因组 7、LTR 第三章 分子克隆 1、分子克隆：按照人的意愿，在体外将制备的DNA片段与载体重组，然后导入受体细胞，并在受体细胞中复制、扩增，以获得该DNA分子的大量拷贝，此过程称为分子克隆，也称基因克隆或DNA克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 2、质粒：是细菌染色体以外具有自主复制能力的小型双链环状DNA分子，能自我复制并表达其所携带的遗传信息 3、限制性核酸内切酶：RE是一类能识别和切割双链DNA 特定核苷酸序列的核酸内切水解酶 4、分子克隆的基本步骤：1、目的基因的制备；2、载体的选择和制备；3、目的基因与载体连接；4、重组DNA导入受体细胞；5、目的基因的筛选与坚定 插入失活的原理：P46 蓝白斑实验：P46 载体的概念及应具备的特征。 第四章 核酸分子杂交技术 1、核酸分子杂交的基本原理：利用核酸变性和复性的性质，使具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下按照碱基互补配对原则形成异质双链的过程。 2、核酸探针的概念：是指能与特定核苷酸序列发生特异性互补杂交，杂交后可用特殊方法检测的已知被标记的核酸分子 3、核酸探针的种类：基因组DNA探针；cDNA探针；RNA探针；寡核苷酸探针 4、变性：DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，DNA分子互补碱基对之间的氢键断裂，使双链DNA分子变成两条单链DNA的过程。 5、复性：在适当条件下，变性DNA的两条互补单链通过碱基互补配对原则重新缔合，形成双链的过程（又称杂交） 6、随机引物标记法的原理：P56 7、DNA缺口平移法进行探针标记的原理：P55 8、Southern印迹的原理+基本过程：是指将电泳分离、原位变性的单链DNA片段转移到固相支持物上，然后，与核酸探针杂交，检测DNA的方法。 9、原位杂交的原理：标记探针与细胞或组织切片中的核酸进