细胞生物学实验教案教材分析.doc

目录 第一部分：普通光学显微镜原理与使用 ………………………………….1 附实验 普通生物显微镜的使用及动植物细胞观察 ………………………….6 第二部分：特殊显微镜原理与使用 ……………………………………….8 附：BX51荧光显微镜的使用 …………………………………………….17 第三部分显微标本制作技术……………………………………………….20 附实验 人血涂片的制作 …………………………………………………………… 29 附实验 石蜡切片技术…………………………………………………………………31 附实验 冷冻切片技术 ………………………………………………………………34 第四部分 数码显微摄影技术 ……………………………………………………… 36 第五部分 细胞器的分离………………………………………………………………39 第六部分 电子显微镜原理与使用……………………………………………………41 第七部分 超薄切片技术………………………………………………………………47 附实验 电子显微镜样品制备与观察 ………………………………………………56 第八部分 扫描电子显微镜原理结构及样品制备技术 ………………………………60第一部分：普通光学显微镜原理与使用 主要内容 显微镜的发展 显微镜的光学原理 显微镜的几个基本概念 显微镜的结构 显微镜的使用 显微镜的维护 要知道的几个重要的分辨率 人眼：0.2mm/250mm 光学显微镜：0.2um 电子显微镜：0.2nm 1 显微镜的发明 1.1 人眼：人眼观察物体的能力是有限的。一般的情况下，在25cm的明视距离内，人眼只能分辨相距0.1-0.2mm的两个物体。也就是说，当两个物体相距不到0.1mm的时候，人眼就会把它们看成是一个物体了。这个极限便称为人眼的分辨本领。 人眼视锥细胞直径为4微米，对应的视角约为30秒，这个角度就是视角的极限。一般要能清晰的分辨两个点，视角须在1分以上。高1米的物体距眼睛3400米时，视角为1分。 1.2 放大镜：约在四百年前眼镜片工匠们开始磨制放大镜。当时的放大镜的放大倍数只有3—5x 1.3 显微镜： 1590年，荷兰和意大利的眼镜制造者造出类似显微镜的放大仪器。 1673～1677年期间，列文胡克制成单组元放大镜式的高倍显微镜 19世纪70年代，德国人阿贝奠定了显微镜成像的古典理论基础。 1850年出现了偏光显微术； 1893年出现了干涉显微术； 1935年荷兰物理学家泽尔尼克创造了相衬显微术， 2 显微镜的光学原理 2.1折射和折射率 光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以直线传播，当通过不同密度介质的透明物体时，则发生折射现象，这是由于光在不同介质的传播速度不同造成的。 2.2凸透镜的五种成象规律(1) 当物体位于透镜物方二倍焦距以外时，则在象方二倍焦距以内、焦点以外形成缩小的倒立实象； (2) 当物体位于透镜物方二倍焦距上时，则在象方二倍焦距上形成同样大小的倒立实象； (3) 当物体位于透镜物方二倍焦距以内，焦点以外时，则在象方二倍焦距以外形成放大的倒立实象； (4) 当物体位于透镜物方焦点上时，则象方不能成象； (5) 当物体位于透镜物方焦点以内时，则象方也无象的形成，而在透镜物方的同侧比物体远的位置形成放大的直立虚象。 2.3显微镜的成像原理 显微镜和放大镜起着同样的作用，就是把近处的微小物体成一放大的像，以供人眼观察。只是显微镜比放大镜可以具有更高的放大率而已。 物体位于物镜前方，离开物镜的距离大于物镜的焦距，但小于两倍物镜焦距。所以，它经物镜以后，必然形成一个倒立的放大的实像AB。 AB靠近F2的位置上。再经目镜放大为虚像AB后供眼睛观察。目镜的作用与放大镜一样。所不同的只是眼睛通过目镜所看到的不是物体本身，而是物体被物镜所成的已经放大了一次的像。 3 显微镜的几个基本概念 3.1 光源：能发射光波的物体。 可见光频率范围：7.5×1014 - 3.9×1014 Hz。 真空中对应的波长范围：390nm – 760nm 相应光色：紫、蓝、青、绿、黄、橙、红 3.2 分辨率(鉴别距离)：显微镜能分辨的最小距离，用D表示。显微镜的鉴别距离越小，分辨率越高。 D=0.61λ/ nsin (/2 D：分辨率 λ:光波的波长 N:介质折射率 α:物镜孔径角 3.3 孔径角：由标本上一点发出的进入物镜最边缘光线L和进入物镜中心光线OA之间的夹角(称为孔径角。 3.4 数值孔径：令N·A = n