【2017年整理】临床基因扩增(PCR)诊断实验室工作规范(试行).doc

附件2 临床基因扩增（PCR）诊断实验室工作规范（试行） 为使基因扩增诊断技术规范有效的用于临床，保证检测质量，更好地为临床疾病的诊疗服务，特制定本规范。 1．临床基因扩增实验室的设置：和仪器设备 临床PCR实验室应分为四个隔开的工作区域，每一区域都应有专用的仪器设备。即1）试剂贮存和准备区；2）标本制备区；3）扩增反应混合物配制和扩增区和的扩增产物分析区。如使用扩增和产物检测同时完成的荧光定量PCR方法或全自动分析仪如Cobas－T（Anplicor）等，则3）和4）两个区可合并。 与上述特定实验区有关的各个房间必须有明确的标记，以避免不同工作区内的设备物品如加样器、试剂等的移出或不同的工作区间发生混淆。进入各个工作区必须遵循一严格的）顺序，只能按单一方向进行，即从试剂贮存和准备区～标本制备区～扩增反应混合物配制和扩增区～扩增产物分析区。不同的工作区必须使用不同的工作服，可以不同的颜色来区别。此外，当工作人员离开各工作区时，不得将各区特定的工作服带出。 1．l．试剂贮存和准备区 本区用于贮存溶液的制条、溶液的分装和主反应混合液的制各。本区仪器设备配置：（l） 4 冰箱和一20 冰柜；（ 2）混匀器；（3）微量加样器若干支（覆盖1～1000pl）；（5）专用工作服和工作鞋；（6）专用办公用品；（7）消耗品： 一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离。心管和加样器吸头（带滤心）；（8）可移动紫外灯（近工作台面）。 1．2．标本制备区 标本贮存、核酸提取及贮存均在本区内进行。RNA测定时的单键。cDNA合成也在本区进行。本区仪器设备自己置：（ l）4冰箱、－20 或-70 冰柜三（ 2）高达台式冷冻离心机；（3）混匀器；（4）水浴箱或加热模块；（5）微量如排器若干支（覆盖l～1000μl）；（6）专用工作服和工作鞋；（7）专用办公用品；（8）消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的部心管和加样器吸头（带滤心）；（9）可移动紫外灯（近工作台面）；（10）超净工作台；（11）超声波水浴（处理大分子DNA适用）。 1．3．扩增反应混合物配制和扩增区 模板材料（来自标本制备区）和主反应混合液（来自试剂贮存和准备区）的加入以及扩增反应等专门在本二．作区内近行。本区仪器设备自己置：（l）核酸扩增仅三（2）微量加样器（覆盖1～1000 μl）；（3）专用工作服和工作鞋；（4）专用办公用品；（5）消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、高压处理的部心管和加样器吸头（带滤心）；（6）可移动紫外灯（近工作台面）。 1．4. 扩增产物分析区 本区面积应为6～8m 。扩增严物的分析在本区进行。本区仪器设备配置：视检测方法不同而定，如为PCR#0;ELISA，则需（l）微量加样器若干支（覆盖l～2s（2）酶标权、洗报机和恒温箱;（3）专用工作服和工作鞋；（4）专用办么，用品；（5）消耗品：～次性手套、一次性吸水纸、加样器吸头（带滤心）；（6）可移动紫外灯（近工作台面）。 2．临床基因扩增诊断实验室质量保证 临床基因扩增诊断实验室质量保证涉及到整个基因扩增检测的所有阶段，即测定分析前的标本来集处理、测定中的核酸提取、扩增和产物分析以及测定后的结果报告等。 2．1．标本的采集 常用于基因扩增检测的临床标本包括EDTA或拘檬酸钠抗凝全血或骨髓、血清或血浆．痰、脑普液、尿及分泌物等。采样容器最好是密闭的一次性的，如真空系血管。一次性塑料容器使用时无需进一步预处理。当使用非密闹采样系统时，如尿、分泌物和骨髓的采禅，必须注意防止来自来样者的皮屑或分泌物的污染。采样者采样时起码要谈．一次性手套。可重复使用的玻璃器〔应高压处理，因为玻璃器（常含有不易失活的ANA酶。RNA酶的主要来源是实验人员的手。最好是热灭菌， 250 烘烤 4小时以上可使RNA酶永久性失活。全血和骨髓标本必须进行抗凝处理。通常EDTA和拘檬酸盐是首选的抗凝剂。不能使用肝素抗凝，因为肝素是Taq酶的强抑制剂，而且在其后的核酸提取步骤中很难去除肝素。临床用于RNA（如HCV RNA）测定的血标本最好进行抗凝处理，并尽快（3小时以内）分离血浆，以避免RNA的降解。如未作抗凝处理，则物血后，必须在1小时内分离血清。 2．2．标本的稳定化处 DNA分析，标本采集后一般不需要特殊的稳定化处理，但标本应及时送到实验室。由于RNA易于降解，因此用于RNA测定的标本的稳定化处理有时是必不可少的， Chaotropic物质[特别是异硫氨酸抓盐（Guanidine thiocyanate，GITC）]可使DNAse和RNAse立即失活。 在采集标本时，可将标本材料如血清或血浆加入含有GITC的试剂管中进行稳定化处理。GITC可使RNAse不可逆失活的适合浓度为5mol/L。如果GITC浓度小于 4mol／L；RNA会很快降