纤维蛋白原的检测方法及进展教材分析.ppt

即凝血因子I，是血浆中含量最高的一种凝血蛋白．是凝血系统的核心蛋白质，它在凝血过程的最后阶段被凝血酶转化成纤维蛋白单体，最终形成不溶性纤维蛋白凝块而发挥血液凝固作用。 纤维蛋白原结构 Fg是分子量为340 KDa的血浆糖蛋白，由肝细胞和巨核细胞合成，约占血浆总蛋白的2 ～3 % 。健康人血浆中浓度为2．0～4．0 g／L，电泳分离显示在β2区带。 在结构上Fg是由两条Aα链、两条Bβ链和两条γ链组成，每三条肽链（Aα、Bβ、γ肽链）绞合成索状，形成两条索状肽链，两者的N-端通过二硫键相连，整个分子成纤维状。 纤维蛋白原功能 血浆Fg主要的生理功能是作为凝血蛋白(又称凝血因子)直接参与体内凝血过程，是纤维蛋白的前体，在凝血机制中参与凝血共同途径，由可溶性Fg转变为不可溶性纤维蛋白，使血液凝固。(主要功能是它的可凝固性) 机制：在凝血酶作用下，纤维蛋白原分子中的两条α链的A肽和两条β链的B肽都断裂，形成纤维蛋白单体 ，凝血酶对纤维蛋白原的 γ链无裂解作用。 纤维蛋白单体生成后即开始聚合成纤维蛋白。在纤维蛋白稳定分子（ⅩⅢa）作用下，经过共价交联的纤维蛋白网更加牢固。纤维蛋白与凝血酶有高亲和力，因此纤维蛋白生成后即能吸附凝血酶，有助于局部血凝块的形成 纤维蛋白临床意义 当Fg值超过正常参考范围(2．0～4．0 g／L)时，即表示凝血功能异常；若低于1．5 g／L时，机体出血的概率明显增加 Fg同时又是一种急性时相反应蛋白，其增加往往是机体的一种非特异性反应，血浆Fg升高（＞4g/L）见于糖尿病、急性传染病、肾病综合症、妊高症、心脑血管疾病、恶性肿瘤等 纤维蛋白原减少（＜2g/L）见于弥散性血管内凝血、原发性纤溶症、重症肝炎等 纤维蛋白原与心脑血管疾病 心脑血管疾病是现代人群中的常见病，其发生大都存在着Fg的异常增高。 Fg是血浆黏度增高的主要因子,Fg能增强红细胞和血小板聚集性，提高全血黏度，使血液处于高凝和高黏状态，影响组织血液灌注，促使血栓形成。 纤维蛋白原与肾病糖尿病 肾病综合征及慢性肾病患者均存在高凝状态，Fg含量增高为其重要特征。 机制：尿中大量丢失以白蛋白为主的小分子量蛋白质，出现低蛋白血症，刺激肝脏代偿性合成蛋白质增多，血浆Fg和凝血因子Ⅷ活性增高被认为是肝脏合成蛋白质增多的一种表现，这两种高分子量的凝血前质不能由尿丢失，它们在血浆中的高浓度、高活性是肾病综合征血栓形成的部分危险因素。 糖尿病是血栓前状态，其血浆黏度、Fg浓度均明显高于正常。 改善体内血浆黏度和Fg含量对控制和治疗肾病糖尿病有着重要的意义。 纤维蛋白原与DIC 纤维蛋白原减低见于DIC：弥漫性血管内凝血，激活纤维蛋白溶解酶原，使血中纤维蛋白溶解酶活力增加，溶解纤维蛋白，消耗体内原有的Fg，使其含量减少 纤维蛋白原的检测方法 近年来对纤维蛋白原的测定日益重视，对其测定的精度也提出了更高的要求 ：美国规定检测结果在靶值±20％ 的范围内，目前测定主要包括Fg血浆水平、亚组分(HF和LF) 、纤维蛋白单体聚集功能、基因多态性等几个方面，其中血浆Fg含量测定最为常用 血浆Fg含量测定方法多达数十种，按原理分为三类，即功能、物理化学和免疫学测定法 (一)功能测定法 该法又称为可凝固蛋白法，即将Fg作为可凝固蛋白来测定，因普遍认为Fg的主要特性是其可凝性，所以血浆可凝固Fg的检测已成为Fg的主要评判标准 功能测定法利用Fg特异的2种生化反应，即凝血酶的蛋白水解作用和随后发生的纤维蛋白单体聚集为纤维蛋白多聚体。在这些 方法中，通过加入凝血酶形成纤维蛋白凝块后的检测手段不同，又可分为重量测定法、酚试剂比色法、紫外光度法、浊度法和凝血酶凝固时间法等。 1．重量测定法 将Fg转变成纤维蛋白凝块经反复洗涤脱水后，用精密天平(精确到0．000 1 g)称重。该法简单，不需要复杂的操作或精密仪器，技术误差很小。在80年代有一些大型流行病学研究将该法作为参考方法 2．酚试剂比色法 在世界卫生组织(wH0)推荐的参考方法出来前曾作为参考方法。该法将过量的凝血酶加入血浆中，将产生的纤维蛋白凝块洗涤数次后溶于NaOH溶液中。用Folin—Ciocalteau酚试剂或Biuret反应来测定。 3.紫外光度法 该法将纤维蛋白凝块溶解于碱性尿素溶液中，然后通过在280nm波长紫外光直接比色计算纤维蛋白原的含量 在此基础上，又发展成为2种参考方法，即Ancrod法和改良的Jacobsson法 Ancrod法: Ancrod(凝血酶代替品)对Fg有高特异性，不象凝血酶会作用于除Fg外的其他几种血浆蛋白，如因子Ⅷ 。纯化的Ancrod只作用于a链并释放A纤维蛋白肽，而不会被血浆中的肝素抑制，并对纤维蛋白降解产物灵敏度低