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综合项目一 不同蔬菜水果中基本营养成分分析 实验一 总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸法） 一、实验目的 1、掌握总糖的测定原理。 2、学习用比色法测定还原糖的方法。 二、实验原理 三、实验试剂 1、2mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。 2、3,5-二硝基水杨酸试剂：称取0.325g 3,5-二硝基水杨酸溶于15mL热蒸馏水中，溶解后移入50ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液16.25mL，再加入2.25ml丙三醇，摇匀，冷却后定容至50mL。 3、2mg/mL葡萄糖标准溶液：称取0.04g葡萄糖，加少量的蒸馏水溶解后，定容至20mL。 4、6mol/L盐酸：取25mL浓盐酸用蒸馏水稀释至50mL。 5、6mol/L氢氧化钠：称取12g氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。 四、实验步骤 1、葡萄糖标准曲线的制作 取6支试管，按下表加入2mg/mL葡萄糖标准溶液和蒸馏水： 管号 2mg/mL葡萄糖标准溶液/mL 蒸馏水/mL 葡萄糖浓度mg/mL OD540 1 0 1 0 2 0.2 0.8 0.4 3 0.4 0.6 0.8 4 0.6 0.4 1.2 5 0.8 0.2 1.6 6 1 0 2 在上述试管中分别加入3,5-二硝基水杨酸试剂2mL，摇匀后于沸水浴中加入2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得出回归方程。 2、总糖的提取 称取1g实验材料（如新鲜果蔬），充分研磨后，放在锥形瓶中，加入6mol/L盐酸10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热30min。水解完毕后，冷却至室温后，加入8mL 6mol/L氢氧化钠，最终用蒸馏水定容至50mL，此为总糖水解液，用于总糖测定。 3、总糖含量的测定 取4支试管，按下表加入不同溶液： 管号 蒸馏水/mL 总糖水解液/mL 3,5-二硝基水杨酸试剂/mL OD540 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 加完试剂后，摇匀后于沸水浴中加入2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的糖含量（mg/mL）。 4、计算总糖的百分含量 总糖=（C×V / m×1000）×稀释倍数×0.9×100% 式中,C为总糖提取液的浓度mg/mL；V为总糖提取液的总体积mL；m为样品质量g 五、实验结果 1、葡萄糖标准曲线的绘制 （1）光吸收值测得结果 管号 2mg/mL葡萄糖标准溶液/mL 蒸馏水/mL 葡萄糖浓度mg/mL OD540 1 0 1 0 2 0.2 0.8 0.4 3 0.4 0.6 0.8 4 0.6 0.4 1.2 5 0.8 0.2 1.6 6 1 0 2 （2）葡萄糖标准曲线图： （3）回归方程为： 2、样品总糖含量的测定 （1）材料____________总糖含量的测定 管号 蒸馏水/mL 总糖水解液/mL 3,5-二硝基水杨酸试剂/mL OD540 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 样品的光吸收值平均值为___________________________。 根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。请说明具体计算过程： 从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。请说明具体计算过程： （2）材料____________总糖含量的测定 管号 蒸馏水/mL 总糖水解液/mL 3,5-二硝基水杨酸试剂/mL OD540 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 样品的光吸收值平均值为___________________________。 根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。请说明具体计算过程： 从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。请说明具体计算过程： （3）材料____________总糖含量的测定 管号 蒸馏水/mL 总糖水解液/mL 3,5-二硝基水杨酸试剂/mL OD540 1 1 0 2 2 0 1 2 3 0 1 2 4 0 1 2 样品的光吸收值平均值为___________________________。 根据标准曲线的回归方