ARMS法检测__培训课件.ppt

人KIF5B-RET融合基因检测试剂盒（ARMS-荧光PCR法） 本试剂盒用于定性检测非小细胞肺癌等患者KIF5B-RET融合基因7种融合型，产品包含独家稳定剂，在达到1%高灵敏度的前提下，仍可保证高特异性，避免假阳性。检测结果可供医生在非小细胞肺癌患者中选择适合Ret抑制剂的靶向药物治疗的人群时参考。检测结果仅可用于临床参考，不可作为诊治的唯一依据。仅可用于体外检测。 人类BRAF基因突变检测试剂盒（ARMS-荧光PCR法） （广州好芝生物科技有限公司） 本试剂盒以石蜡包埋病理切片组织中提取的DNA 为检测样本，定性检测肿瘤患者体细胞的BRAF 基因V600E 突变状态，用于辅助临床甲状腺癌诊断、分型，或对黑色素瘤、结直肠癌的酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）和BRAF 基因突变靶向药物选用提供参考。 ADx-ARMS?PDGFRA基因D842V突变检测试剂盒 （厦门艾德生物医药有限公司） PDGFRA基因编码的蛋白质是血小板衍生生长因子受体A(Pdgfr-a),为一种单链跨膜糖蛋白，与C-KIT同属III型酪氨酸蛋白激酶家族，且结构相似，两者的氨基酸序列有很高的同源性。PDGFRA与配体PDGF结合后形成受体配体复合物并活化PDGFRA，从而激活***脂酰肌醇、cAMP及多种蛋白质的***酸化途径，通过各种信号转导通路将有丝分裂等信号传递入细胞核，诱导相应基因表达，促进DNA合成，引起细胞分裂和增殖。当受体或配体发生异常突变，可导致恶性肿瘤。 人EGFR基因29种突变型检测试剂盒（PCR-荧光探针法） 本检测试剂盒采用PCR方法结合荧光探针的体外扩增和和检测技术，适合于检测非小细胞肺癌病人血清或血浆、组织样本中的EGFR基因29种常见突变型，该检测试剂盒仅用于科学研究使用。 目前用于科学研究阶段的有： β地贫ARMS法4种常见突变诊断试剂盒 该试剂盒应用于产前基因诊断，应用该试剂盒检查了95例β地贫的常见突变，获得了满意的结果。对一个重型β地贫家系4例基因型的检测也证明这种检测方法的可行性和可靠性。 ARMS法检测G6PD 应用突变特异性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)检测江西省常见的3种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症突变基因G1376T、G1388A、A95G.方法用ARMS法对40例江西籍经G6PD/6PGD比值证实为G6PD缺乏者进行检测.结果 40例江西籍G6PD缺乏者检出G1376T11例(27.5%)、G1388A17例(42.5%)、A95G1例(2.5%).3种突变占40例G6PD缺乏者G6PD突变基因类型72.5%,末定型11例.结论 ARMS是一种简单、省时、经济、准确的检测G6PD基因常见突变的方法 ARMS法 ARMS法技术 ARMS法与测序法比较 ARMS原理 ARMS应用 目前，突变扩增阻滞系统（amplification refractory mutation system，ARMS）已成为国际上肿瘤个体化分子检测最重要、最先进的技术之一，其在临床应用中的优势已被业内专家广泛认可。 ARMS技术优点 ARMS方法检测灵敏度明显高于直接测序法等其他方法（表1），可检测出样品中含量低至0.1-1.0%的突变基因；该方法在设计上可以最大限度地缩短目标产物的长度，可以解决石蜡包埋组织标本提取的DNA大部分片段化而无法得到准确检测结果的难点；该方法结合实时PCR平台实现扩增时闭管操作，操作简单，无需产物的后处理，能最大程度地避免扩增产物的污染。 表1 ARMS法与测序法比较 测序法 ARMS法 敏感度 10-20% 1% FFPE标本成功率 低 高 商用试剂盒 无 有 流程与速度 复杂\慢 简单\快 数据分析要求 高 低 试剂成本 低 略高 仪器成本 高 低 假阳性机会（交叉污染） 多 少 其中ARMS检测可以分为实时荧光定量PCR和巢式ARMS法电泳检测。 实时荧光定量PCR ARMS技术利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，与此同时，利用探针对扩增产物进行检测，在实时荧光定量 PCR平台上实现对样品DNA中稀有突变的检测，以达到对基因突变检测的高特异性和高灵敏度。 该技术所用探针为 Scorpion 探针， Scorpion 探针是一种新型的探针， 由一条发夹结构的探针和一条引物构成， 探针的 5 端和 3 端分别标有报告荧光和淬灭荧光， 3端通过PCR blocker（一个非扩增的单体 , 防止探针退火后的延伸）与引物的 5 端相连。 在自由状态， 报告荧光和淬灭荧光很接近， 不产生荧光。 变性阶段茎环结构打开， 退火时引物与模板结合并延伸， 环区与新合成的目的基因的互补区域结合，