细菌的生理生化实验.pptVIP

实验六 细菌的生理生化实验 实验目的 巩固微生物无菌接种技术； 了解细菌鉴定中常用的生理生化实验的原理和方法 微生物的生理生化反应 微生物细胞在酶的催化下进行各种各样的生理生化反应 把微生物细胞在一定的条件下培养，通过观察生理现象和检查代谢产物，可以了解微生物的代谢过程和代谢的特点 由于不同的微生物可能具有不同的酶，代谢途径和代谢产物可能也有不同，生理生化反应是微生物分类鉴定的重要指标之一。 淀粉水解实验 糖发酵实验 原理： 丙酮酸裂解生成乙酰CoA与甲酸，甲酸在酸性条件下在甲酸氢解酶作用下可进一步裂解生成H2和CO2——产酸产气 缺少甲酸氢解酶——产酸不产气 步骤：配制糖发酵培养基——接种——培养（约24h)——观察结果 结果： 紫色无气泡，既不产酸也不产气用 - 表示； 黄色无气泡，产酸不产气，用 + 表示； 黄色且有气泡，产酸产气，用 0 表示。 甲基红实验（M.R实验） 原理 微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸——pH下降——加入指示剂甲基红——红色 步骤：配制蛋白胨水培养基——接种——培养（约24h) ——加入指示剂甲基红1~2滴——观察结果 结果： 红色——M.R实验阳性，用 + 表示； 不变色——M.R实验阴性，用 - 表示； V.P实验 V.P实验 步骤：配制蛋白胨水培养基——接种——培养（约24h) ——5~10d 40%KOH, 5~10d 5%a-奈酚和少量肌 醇 ，取出塞子，用力震荡，保温（37度15~30min）——观察结果 结果： 红色——V.P实验阳性，用 + 表示； 不变色——V.P实验阴性，用 - 表示。 实验内容 以组为单位进行淀粉水解实验、糖发酵实验、 V.P实验和M.R实验。 实验菌种： 淀粉水解实验、糖发酵实验：大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌 V.P实验和M.R实验：大肠杆菌、产气杆菌 注意事项： 实验报告： 1、列表记录实验结果 2、思考题：第4小题 四大类细胞型微生物菌落的鉴定 初步鉴定 微生物菌落特征的记录和描述 菌落形态：形状，边缘情况 大小： 表面状况：湿润、粘稠或干燥，隆起或扁平，厚或薄，是否粉末状 质地：致密或疏松 蔓延程度： 与培养基结合程度 颜色（正面、反面、边沿、中心） 气味 示例 将菌株在查氏琼脂平板上25 ℃培养7d 后菌落直径18~19mm ， 圆形，边缘齐整不蔓延，表面丝绒状并具放射状沟纹，较厚，中央稍凸起，，菌丝初为浅黄褐色近于淡粉红色，老后颜色变深，有黄色渗出液，背面呈黄褐色。 * 淀粉培养基 + 淀粉培养基 + 接种 + 变色圈，水解圈 培养24h 加卢哥氏碘液 I-KI 结果： 有水解圈—淀粉水解实验阳性，用 + 表示； 无水解圈—淀粉水解实验阴性，用 - 表示； 确证：显微镜观察 *