组织固定[精选].ppt

病理学技术－组织固定 安徽医科大学 病理学教研室 王弦 简 要 回 顾 病理学(Pathology)是用自然科学的方法，研究疾病的病因、发病机制、形态结构、功能和代谢等方面的改变，揭示疾病的发生发展规律，从而阐明疾病本质的医学科学。病理学既是医学基础学科，同时又是一门实践性很强的具有临床性质的学科。 病理学技术是病理学的一个重要分支，是病理学研究中的方法学，是病理诊断的基础。 包括如下六个方面 ： 1.常规病理 ：取材、固定、脱水、包埋、切片、染色、封片等几个主要步骤 。 2.特殊染色 ：为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。 3.细胞制片 ：宫颈脱落细胞样本、呼吸系统样本、体腔液样本、脑脊液脱落细胞样本、消化道脱落细胞样本等 。 4.免疫组化 ：应用免疫学基本原理。。。 5.分子诊断技术 ：通过从分子水平上完成DNA、RNA或蛋白质检测，从而对疾病作出诊断的方法称为分子诊断技术，目前常用的方法有基因诊断和肿瘤标志物检测。 常用方法：核酸分子杂交（原位杂交、southern杂交、Northern杂交、斑点杂交等）、PCR和生物芯片技术。 6.电镜技术 ：超薄切片 （小于0.1微米 ） 作为实验技术人员大量的工作是病理制片技术，即常规病理切片、特殊染色，以供教学、科研、临床活检诊断之用。 因此，作为科研人员还是诊断医生，必须对病理学技术有相当程度的了解。 常规病理 石腊切片法： 标本切开或取厚块→组织固定→固定后处理→（石腊切片法）脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→脱蜡→各级乙醇→水洗→常规染色或特殊染色→脱水→透明→树胶封片 冰冻切片法： 标本切开或取厚块→冰冻切片→粘片→乙醇固定及水洗→常规染色→脱水→透明→树胶封片。 组织的固定 在制作组织切片的过程中，首先将组织充分固定后才能进行制片，尤其对石蜡切片，这是不可少的重要步骤。 当然，并不是所有的染色都需要对组织进行固定，是因为固定能够使组织中的蛋白产生醛键，使蛋白质交联。 1、固定的意义 就是使要观察的组织构造尽量接近于它生前的正常状态。 2、组织固定的目的 1）迅速防止组织，细胞的死后变化，防止自溶与腐败，以保持组织和细胞与正常生活时的形态相似。 2）使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，以保持它原有的结构与生活时相仿。 3）使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，而产生不同的折射率，造成光学上的差异，以便染色后易于鉴别和观察。 4）固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬度，便于制片。 5）防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。 6）经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辩认。 3、固定剂的性质 为了能够达到固定的目的，必须具备以下的性质： 1）迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织形态不至于有较大变化。2）固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 3）使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变。 4）在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形。 5）尽可能避免使组织膨胀或收缩。6）能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来。 7）增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。增加媒染作用和染色能力。8）使组织变硬，适于制片，但又不使材料太坚硬而松脆。9）使组织充分固定，便于保存。 4、固定剂的作用 1）固定剂可改变蛋白质的分子结构，从而产生沉淀 2）固定剂使蛋白质变性 3）固定剂与蛋白质结合，使之凝胶化 4 ）固定剂对组织有一定的媒染作用。 5、固定的注意事项： 1）固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液，其固定液的量一般不少于组织块总体积的4倍以上，也可达15－20倍 2）取材组织块的厚度不应超过4mm 3）固定时间应充分，3－12h 4）固定温度：25℃， 酶组织化学染色应置于冰箱低温固定 5）做不同的染色应尽量选择合适的固定剂 6 、固定容器 容积较大，防止组织与容器粘连 底部垫有棉絮，使固定剂能均匀渗透组织块 固定期间应轻轻搅拌容器（自动脱水机） 7、常用的固定方法 1）蒸汽固定法 2）注射、灌注固定法 3）浸入和滴加法 4）微波固定法 介绍几种常见固定液 固定剂有简单固定剂（液）和混合固定剂两类。作为较好的固定液，首先有强渗透力，能迅速地渗入组织内部；其次不会使组织过度收缩或膨胀，并能使组织内易观察的成分得以凝固为不溶性物质