组织制片技术概述2013[精选].ppt

用石蜡做为支撑剂将组织包埋成块使其硬化的过程 包括浸蜡和包埋两步 一、浸蜡 组织透明后，用石蜡置换组织内部的透明剂的过程称为浸蜡。 组织块浸蜡一般先经过低熔点蜡，再经过高熔点蜡。 包 埋 高溶点蜡也称硬蜡溶点在60℃--62℃ 硬蜡箱的温度控制在62℃--64℃之间 组织浸蜡时间一般不超过1小时 低溶点蜡也称软蜡溶点在48℃--50℃ 软蜡箱的温度控制在52℃—54℃之间 组织浸蜡时间一般可达2—4小时 二、包埋 组织浸蜡完成后，接着进行组织块包埋。用于包埋的是硬蜡。包埋在包埋器中完成。 修整蜡块时，组织块应距蜡块边缘2—3毫米，以利于连续切片。 切 片 石蜡切片 组织切片中应用最为广泛的一种切片就是用石蜡作为包埋剂制作的切片。易于制作大量菲薄的组织标本，而且包埋块可长期保存。 一、仪器及器材 二、切片过程： 调节恒温水箱水温至47℃左右； 固定蜡块于固定器； 快修装置修整包埋面； 调节切片厚度至4—6微米； 连续切片； 摊片于水箱内； 将蜡片贴于涂好粘片剂的载玻片上； 置于温箱内烤片。 三、切片的注意事项 ① 切片前要将切片机各部位的螺丝旋紧，否则会引起切片机各部件震动，造成切片厚薄不匀。 ② 包埋块的切面和切片刀的倾斜度之间的夹角应按切片机刀台上的刻度作适当调整。 ③ 恒温水箱的温度应比包埋蜡的溶点低5℃--6℃。 染 色 一、染料 指分子中含有发色团和助色团的有机化合物，有鲜艳的色彩，对于组织有极强的亲和力。 根据来源可分为两类： 天然染料（卡红、苏木精） 人工合成染料（苦味酸、桔黄G） 根据其化学性质分为： 碱性染料(basic dye) 酸性染料(acid dye) 中性(neutrophilia)染料 二、染色的原理 染色就是染料和组织细胞的分子相互结合，使组织和细胞着色。 化学反应 在组织细胞内含有酸性物质和碱性物质。染色时酸性物质与碱性染料结合；碱性物质与酸性染料结合。细胞核中主要由酸性物质组成（如核酸等），所以与苏木精等碱性染料有很强的亲和力。细胞质主要由碱性物质组成，所以与伊红等酸性染料有很强的亲和力。 能被碱性染料着色的物质：嗜碱性(basophilia)； 能被酸性染料着色的物质：嗜酸性(acidophilia)。 物理反应 细胞中有许多微小的毛细小孔，染料的色素离子通过这些小孔渗入细胞内，染料与细胞没有牢固的结合，但分散的色素离子和组织细胞分子之间通过分子间相互作用使细胞着色。 三、染色的注意事项： 1.溶媒：水和乙醇。 2.浓度：低浓度，长时间。 3. 温度：高，染色效果明显。 4. 适当使用媒染剂、促染剂和分化剂。 媒染剂：能增强染料对组织的着色能力，其本身与染料或组织发生结合的试剂。如配制各种苏木精染色液时添加的钾明矾、铵明矾等。 促染剂：能增强染料对组织的着色能力，本身并不参与染色反应。如伊红染色液中添加的冰乙酸等。 分化剂：能除去组织上和切片上过染的染色液，使染色部位与周围组织对比鲜明，着色深浅适当；例如低浓度的盐酸、醋酸、高锰酸钾、重铬酸钾等。 封 固 一、定义 最后一道程序是滴加封固剂，用盖玻片覆盖，以利于镜下观察。 阻断组织片与外界的接触，防止组织片脱片、受潮、干裂、机械磨损等，延长切片的使用时间。 这一步骤称为封固。 封固分为干封和湿封两种。 干封：切片染色经脱水和透明后，用中性树胶之类无水封固剂封固。数年不褪色。 湿封：切片染色后直接用含甘油、明胶及少量的水和防腐剂组成的封固剂封固。湿封的标本保存时间不长，主要用于某些组织化学或特殊染色的标本。 二、封固时的注意事项： ① 封固时避免产生气泡。 ② 封固剂应浓度适