细胞生物学实验[精选].ppt

一、实验目的 1. 熟悉并理解细胞膜选择透性这一细胞基本生理活动。 2. 了解各类物质进入细胞的速度。 二、实验原理 细胞膜是细胞与外界环境进行物质交换的结构，它可选择性地让某些物质进出细胞。而对于不同性质的物质，细胞膜的通透性是大不一样的。当细胞与所处的环境存在渗透压差别时，水分子可从渗透压低的一侧向高的一侧扩散，以至于在高渗环境中，细胞会失水而皱缩；而在低渗环境中，细胞会吸水膨胀直至破裂。 由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。 溶血（hemolysis）: 红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。 三、实验用品 （一）仪器 50ml烧杯 10ml移液管 试管 （二）试剂 0.17mol/L氯化钠 0.17mol/L氯化铵 0.17mol/L醋酸铵 0.17mol/L硝酸钠 0.12mol/L草酸铵 0.12mol/L硫酸钠 0.32mol/L葡萄糖 0.32mol/L甘油 0.32mol/L乙醇 0.32mol/L丙醇 （三）材料 鸡红细胞悬液 四、实验步骤 （一）鸡红细胞悬液 取50ml小烧杯一只，加入鸡血1份（1ml）和10（10ml）份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。 （二）低渗溶液 取试管一支加入10ml蒸馏水，然后再加入1ml稀释的鸡血，注意观察溶液的颜色变化，由不透明的红色逐渐澄清，红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。 （三）鸡红细胞的渗透性 1.取试管一支加入0.17mol/L氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？ 2.取试管一支加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入1ml稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间。 3.分别在下列等渗溶液中进行实验，步骤同2。 五、实验结果 将观察到的现象记录，并进行分析、比较： 1. 试管内液体分两层：上层浅黄色透明，下层红色不透明为不溶血（－），镜检红细胞完好呈双凹盘状。 2. 如果试管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血（＋或＋＋），镜检有部分红细胞呈碎片。 3. 如果试管内液体变红而透明者，称完全溶血（＋＋＋），镜检发现细胞全部呈碎片。 六、实验报告 书写实验报告，并就细胞膜对不同物质的渗透性不同，对实验结果进行分析见表。 目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－ 七、问题 1、为什么我们检查细胞膜渗透性的试剂是一定浓度的，如：0.17mol/L的氯化钠，为什么设定为这个浓度？ 2、解释快速溶血的原因，乙醇和丙醇。 一、 细胞培养技术 1.体内培养(in vivo culture): 体内培养技术最大限度地模仿了活体结构的自然生长环境。 最常见的体内培养方式就是移植(transplantation)。 2.体外培养 (in vitro culture) :  按结构成分分为细胞培养(cell culture)  组织培养(tissue culture)  器官培养(organ culture)。 3.细胞株(系)与克隆 二、细胞培养定义： 1. 原代培养 （primary culture）：从动物机体取出的进行培养的细胞群。原代培养的细胞生长比较缓慢，而且繁殖一定的代数后（一般10代以内）停止生长，需要从更换培养基。 2. 传代培养(subculture):培养细胞的生存环境是瓶皿或其他容器，生存空间和营养是有限的，当细胞增殖到一定密度后，需要分离出一部分细胞并更新营养液，这一过程称为传代。将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养（Passage）。 3. 细胞株（cell strain）：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，能够繁殖50代左右，在培养过程中其特征始终保持。 4.细胞克隆(cell cloning)：从一个单一母细胞繁殖出来的细胞群体，细胞克隆方法包括：稀释铺板法、饲养层克隆法、琼脂克隆法等。 三、 细胞培养技术的基本概念（一）动物细胞培养 另一种分类方式将细胞培养方式大致可分为两种： 一种是群体培养（mass culture），将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层（贴壁培养）； 另一种是克隆培养（clonal culture），将高度稀释的游离细胞悬液加入培养瓶中，各个细胞贴壁后，彼此距离较远，经过生长增殖每一个细胞形成一个细胞集