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细菌生化实验[精选]
实 验 十 细菌生化实验 一、实验目的 1、证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同,从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 3、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 4、掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 二、实验原理 1、微生物对生物大分子的分解利用 IMViC试验 吲哚试验: 甲基红试验(M.R.试验): 伏-普试验(乙酰甲基甲醇试验): 柠檬酸盐试验: 三、实验材料 1、菌种:枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),普通变形杆菌(Proteus vularis),产气肠杆菌。 2、培养基:固体油脂培养基,固体淀粉培养基,明胶培养基试管,石蕊牛奶试管,尿素琼脂试管、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支,普通变形杆菌(内装有倒置的德汉氏小管) ,蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基,柠檬酸盐斜面培养基,醋酸铅培养基。 3、溶液或试剂:革兰氏染色用卢氏碘液(Lugol’s iodine solution),甲基红指示剂,40% KOH,5% α-萘酚,乙醚,吲哚试剂等。 4、仪器或其他用具:无菌平板,无菌试管,接种环,接种针,试管架。 四、实验步骤 1、细菌水解大分子物质试验 四、实验步骤 1、细菌水解大分子物质试验 2、糖发酵试验 四、实验步骤 1、细菌水解大分子物质试验 2、糖发酵试验 3、IMViC试验 IMViC试验 五、实验报告 1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“+”表示阳性,“-”表示阴性。 2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气,“-”表示不产酸或不产气。 3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果,以“+”表示阳性反应。“-”表示阴性反应。 4、不利用碘液,你怎样证明淀粉水解的存在? 五、实验报告 5、假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖,发酵试验应该出现什么结果? 6、为什么大肠杆菌的甲基红反应阳性,而产气肠杆菌为阴性?这个试验与伏-普试验最初底物与最终产物有何异同之处? 7、说明在硫化氢试验中醋酸铅的作用,可以用哪种化合物代替醋酸铅? * * 淀粉水解:淀粉酶 油脂水解:脂肪酶 明胶液化:蛋白酶 石蕊牛乳试验:产酸、产碱、胨化、酸凝固等。 2、糖发酵试验 产酸:溴甲酚紫指示剂 大肠杆菌: 产气肠杆菌: 产气:杜氏小管检测 大肠杆菌: 产气肠杆菌: 3、IMViC试验 色氨酸酶:色氨酸→吲哚+对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚(红色) 大肠杆菌: 产气肠杆菌: 产酸能力:强,甲基红变红;弱:甲基红不变色 大肠杆菌:阳性 产气肠杆菌:阴性 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→2,3-丁二醇 乙酰甲基甲醇→OH-→二乙酰+精氨酸的胍基→红色化合物 大肠杆菌:阳性 产气肠杆菌:阴性 能否利用柠檬酸作为碳源 大肠杆菌:阴性 产气肠杆菌:阳性 淀粉水解试验 培养基:淀粉培养基平板 菌种:大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 方法:平板上划“十”字接种 注意:接种前在平板底部作记号;“十”字不要太大 油脂水解试验 培养基:油脂培养基平板 菌种:大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 方法:平板上划折线接种 注意:接种前在平板底部作记号 明胶液化试验 培养基:试管明胶培养基 菌种:大肠杆菌或 产气肠杆菌 方法:穿刺接种 注意:20℃培养 石蕊牛乳试验 培养基:试管石蕊牛乳培养基(2支) 菌种:粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌 方法:斜面划线接种 注意:观察结构注意牛乳产酸、产碱、凝固、胨化现象是连续出现的。 培养基:葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基(内装杜氏小管)(各3支) 菌种:大肠杆菌和产气肠杆菌 方法:分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基 1 液体 葡萄糖蛋白胨培养基 甲基红试验 1 斜面 柠檬酸盐培养基 柠檬酸盐试验 1 液体 葡萄糖蛋白胨培养基 伏普试验 1 液体 大肠杆菌和产气肠杆菌 蛋白胨水培养基 吲哚试验 接种 管数 接种方式 菌种名称 培养基名称 试验名称 *
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