体液免疫球蛋白测定全解.ppt

抗体（antibody,Ab)：是B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的能与相应抗原特异性地结合球蛋白。(生物学功能上的概念) 抗体主要存在于血清等体液中，故将抗体介导的免疫称为体液免疫。  免疫球蛋白分类及特性 重链性质，Ig分5类：IgG(γ)、IgA(α)、IgM(μ)、 IgD(δ)、IgE(ε) 轻链性质，Ig分2型：κ、λ Ig占血浆蛋白总量：20% Ig含量：血清 IgG、IgA、IgM：g/L、 IgD、IgE：mg/L 体液 IgG、IgA、IgM：mg/L 检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病 年龄：血液Ig随年龄、性别、血型、种族及测定方法不同有所差别，各实验室要建立自己的参考范围 二、尿液免疫球蛋白测定的临床意义 正常人尿液中的Ig含量甚微，当机体的免疫功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。 三、脑脊液免疫球蛋白测定的临床意义 生理情况下，Ig根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，IgG、IgA、IgM在脑脊液中的浓度递减。病理状态时，血脑屏障通透性增加，脑脊液组分发生改变。 第二节血液IgD和IgE的测定及临床应用 正常人血液中IgD含量很低（0.2%），目前生物学功能尚不清楚 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起I型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。 一、IgD的测定及临床意义 测定方法：放免、免疫比浊、ELISA(常用) 临床意义：血液中含量波动范围大，各实验室最好使用固定的试剂盒，建立自己的参考范围 二、IgE的测定及临床意义 测定方法： 总IgE测定：放射免疫分析法 化学发光免疫分析法(常用) 免疫比浊法 酶联免疫吸附法(常用) 特异性IgE测定：免疫斑点法 酶联免疫吸附法 临床意义： 增高：变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。 降低：意义不大 蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清（或尿液）标本中不同性质的蛋白质由于其等电点，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度就不同，可明显分开形成不同的区带，与正常的电泳图谱进行比较，很容易发现患者电泳图谱中不一样的狭窄而浓缩的集中带，即M区带。 这是由于M蛋白的化学结构高度均一，因而其电泳迁移率十分一致。如果将这些区带电泳图谱扫描，还可计算出异常蛋白的含量和百分比。这种M区带较多见于γ或β区，偶亦可见于α区。 该法方便，是筛选M蛋白的最基本方法。但是区带电泳不能判定免疫球蛋白的类型，最终还需用特异性抗体进行鉴定。 二、血清免疫球蛋白定量测定 血清免疫球蛋白定量测定也可作为检测M蛋白的初筛试验。免疫球蛋白定量测定较常用的方法有单向扩散法与免疫浊度法，前者较为简便，后者更为准确迅速 免疫球蛋白定量检测，有助于丙种球蛋白病的诊断，并对丙种球蛋白病的良、恶性鉴别有帮助。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某一类丙种球蛋白的显著增高，大多在30g/l以上；在良性丙种球蛋白病的血清标本中，M蛋白多在20g/l以下 三、免疫电泳（常规方法） 疑为丙种球蛋白病的患者，经血清蛋白区带电泳和免疫球蛋白测定，已基本证实是否有免疫球蛋白的异常增高和其含量的多少，但是增高的M蛋白究竟是哪一类免疫球蛋白，仍需进一步分类鉴定，常应用各种类型的特异性抗血清，做不同形式的电泳或免疫扩散。 免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。 一般多用抗IgG、IgM、IgA、κ和λ轻链等5种抗血清进行实验，用抗正常人血清作为对照。M蛋白与相应抗体发生反应所出现的沉淀弧较为特殊，较普通沉淀弧宽，凸出呈弓形，不难辨认 四、免疫固定电泳（最常用） 区带电泳+沉淀反应：将待测血清或其他标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗κ或λ轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链和重链型别 结合蛋白质电泳的高分辨率和抗原抗体反应的特异性 测定时间短(1.5-2h)、敏感性高（0.5-1.5g/l）、结果直观易于分析判断 五、本-周蛋白的检测 本周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链，其检测对轻链病的诊断是必不可少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白病、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助 加热沉淀法:本周蛋白在pH5.0的条