第三章高效液相.ppt

检测器 要求灵敏度高、噪声低（即对温度、流量等外界变化不敏感）、线性范围宽、重复性好和适用范围广。 检测器利用溶质的某一物理或化学性质与流动相有差异的原理。当溶质从色普柱流出时，会导致流动相背景值发生变化，从而在色谱图上以色谱峰的形式记是下来。。 几种检测器的主要基本特点 1. 紫外检测器（UV-VIS） 应用最广，对大部分有机 化合物有响应。 工作原理：Lambert-Beer定律 特点： 灵敏度高10-9~10-11 g/ml ； 线形范围高； 流通池可做的很小（1mm ×10mm，容积 8μL）； 对流动相的流速和温度变 化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 紫外检测器灵敏度高，精密度及线性范围较好 ，可用于梯度洗脱。 流动相选择有限制。 一些常用溶剂的紫外截止波长 205 甲醇 190 乙睛 212 四氢呋喃 210 苯 187 245 380 紫外截止波长 /nm 水 氯仿 CS2 溶剂 2、荧光检测器 对许多有机化合物。，被一定强度和波长的紫外光照射后，发射出较激发光波长要长的荧光，荧光强度与激发光强度、量子效率和样品浓度成正比。 有的有机化合物虽然本身不产生荧光，但可以与发荧光物质反应衍生化后检测。因此，利用物质的荧光通性，产生了荧光检测器 。 特点： （1）非常高的灵敏度和良好的选择性灵敏度要比紫外检测法高 2 一 3 个数量级； （2）所需样品量很小，特别适合药物和生物化学样品的分析。特别是芳香族化合物、生化物质，如有机胺、维生素、激素、酶等 例子： ?灵敏度高，选择性好，可用于梯度洗脱。 3. 光电二极管阵列检测器 适于：复杂样品的定性和定量分析 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 光电二极管阵列检测器 4. 示差折光检测器（differential refractive index detector） 除紫外检测器之外应用最 多的检测器； 工作原理：可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度呈正比； 通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）；灵敏 度低、对温度敏感、不能用于 梯度洗脱；偏转式、反射式和 干涉型三种。 示差折光检测器： ?通用性好，灵敏度较低，不适用于梯度洗脱。 ?利用组分与流动相的折射率之差进行检测。 5.化学发光检测器 6. 电化学检测器 电导检测器 安培检测器 7. 质谱检测器 质谱检测 通用性 10-8 g/ml §3.2 基本理论 一 色谱柱柱效的基本关系式 二 分离度 三 速率方程 溶质在液相流动相中的扩散系数，约为气相中扩散系数的万分之一 流动相流速对板高的影响 小颗粒填料，填充均匀； 选择较低的流动相流速； 选择粘度小的溶剂作流动相，改善传质。 修正的速率方程： 提高柱效途径 一、流动相(洗脱剂) § 3.3 HPLC主要参数以及主要影响因素 1、溶剂强度----有机溶剂对样品的洗脱能力 它是描述溶剂色谱性能的主要指标，通常用相对极性和溶解度参数等作为溶剂强度指标。 越大，表明流动相溶剂分子对吸附剂的亲和能力越强，则越易从吸附剂上将被吸附的溶质洗脱下来。 溶剂分子在单位吸附剂表面上的吸附自由能 溶剂强度参数 * 第三章 高效液相色谱(HPLC)及其应用 液相色谱仪 在气相色谱的基础上、色谱理论得到了发展，同时出现了新的高效填充剂，发展了适合于液相色谱用的检测器和高压泵，使液相色谱技术有了新的突破，分析速度和分离效率大大提高并实现了仪器化，形成了色谱技术的一个分支，称为高效液相色谱,仪器于1969年商品化。 其基本概念和方法理论与气相色谱相似。 高压液相色谱示意图 ?高效液相色谱法与经典液相色谱法 经典液相柱色谱装置 高效液相色谱仪 3-10 μm 高压泵 快(1-10mL/min) 150-200 μm 重力或低压泵 很慢 固定相粒径 流动相驱动方式 流动相流速 HPLC 经典液相色谱 例：分离20种氨基酸 柱长：170 cm 柱径：0.9 cm F：30 mL/h t分离: 20 h 经典柱色谱 HPLC t分离：1 h 2特点： 高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。 高速：高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于0.01-1h . 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。 （1））应用