细菌形态学检查1.ppt

医学微生物学实验室规则： 学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒； 进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定的储物柜内； 严禁在实验室进食、饮水和抽烟； 手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手； 实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的垃圾不得随意抛掷，要扔在指定的桶内 细 菌形态学检查 新乡医学院基础医学院科教科 3029945 形态学检查分类 一、不染色标本检查(活体） 悬滴法 压滴法 二、染色标本检查 单染法：简单染色，一种染料 （美兰染色） 复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染 色、抗酸染色） 染色标本检查法的一般步骤 一、涂片制备 涂片 干燥 固定 二、染色 初染 媒染 脱色 复染 注：固定的目的 1、杀死细菌,保持细菌原有的形态和结构 2、增加细菌的通透性，使细菌易于着色 3、使细菌牢牢地黏附在玻片上，不至于在染色 过程中被水冲掉 革兰染色(Gram stain) 1884年由丹麦医师Gram创立 革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义 1、通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说 通透性学说 G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量少，乙醇不易进入 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，乙醇易渗入。 等电点学说 G+菌等电点（pI2~3） G-菌等电点（pI4~5） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。 化学学说 G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色 G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色 1、菌种 葡萄球菌 大肠杆菌 2、试剂 革兰染色液 初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红 3、其它 载玻片 染色盘 接种环 酒精灯等 无菌操作（接种环灭菌和取菌） 涂片的厚度要适中 染色的时间控制，一一半半 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗 七、临床意义 细菌的特殊结构（示教）（二毛荚一胞） 实验报告 一、目的 二、原理（主要） 三、材料 四、方法 五、结果（2+3幅图） 六、意义 七、注意事项 实验结果 1、绘制所涂片染色的G+及G-菌的形态图并注 明放大倍数 2、绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大倍数 透镜 折光率 油 1.515 1.0 空气 玻 1.52 璃 空 气 油镜原理示意图 油镜的使用方法 寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大。 转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 油镜的使用方法 调试观察：观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。［如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。］ 清洗镜头：油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头