蛋白质还原糖脂肪的鉴定实验.ppt

生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的检测 1、实验原理： （1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。 （2）苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 （3）蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应（肽键）。 5、方法步骤： （１）可溶性还原糖糖的鉴定 （水浴加热） （３）蛋白质的鉴定 6、讨论: (1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗?为什么? 答:不行.橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖. (2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？ a溶液浓度不同:斐林试剂中CuSO4溶液为0.05g/ mL, 双缩脲试剂中CuSO4溶液为0.01g/ mL b使用原理不同:斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀, 双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+ c使用方法不同: 斐林试剂使用时,先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合,然后立即使用;双缩脲试剂是先加NaOH溶液,然后再加入3至4滴CuSO4溶液 * * * * （一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定 1.实验原理 当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。 R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O 试剂配制 甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液） 斐林试剂 乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液） 甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。 （二）生物组织中蛋白质的鉴定 1 实验原理 在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu 2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。 试剂配制 A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液） 双缩脲试剂 B液（0.01g/mL的硫酸铜溶液） 2、实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 3、实验选材?（1、材料应富含相关物质，使现象更加明显；2、材料本身应无色，以免对结果产生干扰） （1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨，也可用白萝卜替代。（因为组织的颜色较浅，易于观察。） （2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3～4小时。 （3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。 4、实验试剂 斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、 苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、 双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液 B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、 体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。 防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；甲、乙液混合保存时生成Cu ( OH ) 2在70~90℃下分解成黑色CuO和水； 最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。 4. 试管放在盛有50-65℃温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀） 斐林试剂很不稳定，甲乙液分别加入时可能与组织样液发生反应无Cu ( OH ) 2生成。 甲乙液 等量混合，现配先用，切不可分开滴加，或者久置后才用。 应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。 3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。 因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 苹果或梨组织液必须临时制备 1. 制备组织样液。 （去皮、切块、研磨、过滤） 解 释 注 意 问 题 操 作 方 法 .实验步骤 （1）制备组织样液（教师制备