发育生物学绪论题库.ppt

利用基因序列同源性的克隆法 用一个物种的基因直接做探针分离另一个物种的同源基因； 根据多个物种的蛋白序列分离另一个物种的同源基因； 根据同一基因家族的不同成员间的保守序列分离新的家族成员； 利用大分子间的相互作用克隆新的基因 鉴定可与蛋白质结合的DNA序列 分离靶蛋白质，（可采用gel-shift assay) 克隆靶蛋白的表达基因。 利用DNA与蛋白质间的相互作用 分离时空特异性表达基因的方法 利用蛋白质之间的相互作用 酵母双杂交法 (二)、基因表达的检测 mRNA的检测 蛋白质的检测 启动子活性检测 (二)、基因表达的检测 mRNA的检测 蛋白质的检测 启动子活性检测 mRNA的检测 Northern blot Dot blot RT-PCR DNA Microarray in situ hybridization Northern杂交的作用：检测基因的转录物的存在及是否发生了选择性拼接。 mRNA的检测 原位杂交(in situ hybridization) 利用原位杂交技术研究基因表达的时空谱 mRNA的检测 (二)、基因表达的检测 mRNA的检测 蛋白质的检测 启动子活性检测 蛋白质的检测 电泳法 Western blot 抗体染色法 (二)、基因表达的检测 mRNA的检测 蛋白质的检测 启动子活性检测 启动子活性检测法 表达载体的构建： (三)、基因对发育的影响的功能性研究 基因敲除法(gene knockout) 异位表达法(ectopic expression) Rescue Antisense RNA Antisense oligos DsRNA interference (RNAi) Antibody blocking Dominant negative receptor mutations Dominant interferring allele 用基因敲除法研究基因的功能 三、基因对发育的影响的功能性研究 基因敲除法(gene knockout) 异位表达法(ectopic expression) Rescue Antisense RNA Antisense oligos DsRNA interference (RNAi) Antibody blocking Dominant negative receptor mutations Dominant interferring allele 转基因动物与基因的异位表达 DNA注射； RNA注射； 病毒感染。 用组织特异性启动子控制外源基因的表达 绿色血液 绿色神经细胞 (三)、基因对发育的影响的功能性研究 基因敲除法(gene knockout) 异位表达法(ectopic expression) Rescue Antisense RNA Antisense oligos DsRNA interference (RNAi) Antibody blocking Dominant negative receptor mutations Dominant interferring allele (三)、基因对发育的影响的功能性研究 基因敲除法(gene knockout) 异位表达法(ectopic expression) Rescue Antisense RNA Antisense oligos DsRNA interference (RNAi) Antibody blocking Dominant negative receptor mutations Dominant interferring allele Dominant Negative Receptor Mutations 细胞膜 受体胞外区 受体跨膜区 突变 受体胞内区缺失导致信号传导的中断 受体胞内区 配体 配体 下游信号分子 Dominant Interferring allele (四)、发育是渐进式的、细胞命运决定于不同的发育时间 Fate of cells:指正常发育情况下细胞将发育的方向，这种方向可因条件的改变而改变(see next slide)。 Determination:指细胞特性发生了不可逆的改变，发育潜力已经单一化。 Specification:指一组细胞在中性环境下离体培养，它们仍按其正常命运图谱发育。 两栖动物眼区细胞的潜能随发育时期的不同而改变 原肠胚中眼区将发育为眼睛。 将原肠胚中眼区细胞移植到神经胚的躯干区，它们将按新部位的命运发育为体节和脊索。 将神经胚中眼区细胞移植到神经胚的躯干区，它们仍将发育为类似于眼的结构。 胚胎发育早期，细胞的发育潜力更大！ (五)、诱导作用可使细胞互为不同 扩散性信号分子 跨膜蛋白的直接互作 间隙连接(gap