第四章核酸化学题库.ppt

DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 核酸分子杂交的应用: 研究基因的位置 确定两种核酸序列的相似性 检测样品中的特异序列 基因芯片技术的基础 核酸探针（nucleic acid probe）:能特异性的探测带某一特定序列的DNA或RNA分子的标记核酸分子。 分子杂交技术的应用：基因克隆筛选、酶切图谱制作、特定基因序列的定量和定性、突变分析、疾病诊断等 第五节 核酸酶(nucleases) 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 一、种类 1、根据底物分类 DNase、RNase； 单链核酸酶、双链核酸酶、杂合双链核酸酶 2、根据催化部位分类：外切核酸酶和内切核酸酶 外切酶：5′端→3′端或3′端→5′端核酸外切酶。 内切酶：限制性核酸内切酶和非限制性核酸内切酶。 限制性核酸内切酶(restriction endonucleases)：能够识别DNA分子的特定核苷酸序列，并在识别位点或其周围断开DNA双链的一类核酸酶 参与DNA的合成与修复及RNA合成后的剪接等重要基因复制和基因表达过程 。 负责清除多余的、结构和功能异常的核酸，同时也可以清除侵入细胞的外源性核酸 。 在消化液中降解食物中的核酸以利吸收。 体外重组DNA技术中的重要工具酶 。 生物体内的核酸酶负责细胞内外催化核酸的降解 二、核酸酶的功能 三、核 酶 催化性DNA (DNAzyme) 人工合成的寡聚脱氧核苷酸片段，也能序列特异性降解RNA。 催化性RNA (ribozyme) 作为序列特异性的核酸内切酶降解mRNA。 第六节 核酸的研究方法 一、核酸的分离、提纯和定量测定 （一）DNA的分离 真核生物中DNA和组蛋白结合成DNP形式存于核内，DNP溶于水和浓溶液中，苯酚除去蛋白质，一起冷冻离心，DNA溶于上层水相，然后用乙醇或乙醚沉淀可以提纯DNA。 （二）RNA的分离 目前常用的方法有两个：其一用酸性胍盐/苯酚/氯仿除去蛋白质，小量制备RNA；其二用胍盐/氯化铯将细胞抽提物进行密度梯度离心，RNA密度最大沉于底部，可以大量制备RNA。 （三）核酸含量的测定方法 常用分光光度法、定磷法、定糖法 定糖法常用的也是比色法 RNA与盐酸共热时核糖转化为糠醛，与甲基苯二酚（地衣酚）反应呈现绿色，在670nm处有最大的吸收峰，需要三氯化铁作为催化剂。 DNA在酸性溶液中与二苯胺共热，脱氧核糖可参与生产蓝色化合物，最大吸收峰在595nm (四)DNA聚合酶链式反应 PCR技术的基本步骤：1、设计一对引物以便有效扩增所需要的DNA序列，尽量减少非特异性引物。 2、优化反应体系，以便获得最好的扩增效果：模板、引物、4种NTP 、TaqDNA聚合酶、适量Mg2+。 3、选择3个温度进行热循环：变性，94度，45-60秒；退火1分钟；延伸，72度，1分钟 4、扩增完成后取出一定量反应产物，检查扩增结果。 美国食品和药物管理局在1999年发布的关于营养品工业的报告中，对核酸制剂的评价是“口服的核酸在被吸收之前，在肠道内就会被改变或摧毁。核酸缺乏症并不存在。核酸制剂对人体既无效也无影响。” 专家指出，饮食中的动植物核酸进入体内，并不能被人体直接利用，而是将被彻底分解成核苷、核苷酸等正常人都不缺的普通小分子。事实上，假如外源核酸直接在人体中发挥作用，有可能会用其它动植物的遗传信息扰乱人体本身的遗传信息，导致基因突变，引起机体功能混乱。核酸能推迟衰老,更有媒体宣称，核酸保健品不仅能增强基因自主修复能力，还能促进血液循环，改善微循环、改善脑机能，健脑益智；促进新陈代谢、抗疲劳；提高免疫力、预防传染病；活化皮肤细胞、润肤美容。核酸保健品和药品简直成了一丹万灵药。 只要学一点生物化学常识，就可以知道，虽然核酸作为遗传物质，对人体的生理活动至关重要，但是人体中的核酸都是人体用其他化学物质自我合成的，并不从膳食中直接吸收。膳食中的核酸都将在消化道中被彻底分解掉。因此生物医学界公认核酸不是营养物质，口服核酸不仅不能起到营养、保健作用，而且核酸吃多了，还会对身体造成危害，会导致痛风和结石等疾病。人体不能直接吸收核酸，核酸是分子量很大的生物大分子，细胞膜在正常状态下不能吸收生物大分子，这是细胞的一种自我保护措施。如果生物大分子进入了细胞，细胞机能将会紊乱乃至死亡。病毒感染的机理就是打破了细胞膜，而把核酸注入了细胞中，使人体得病。人体细胞中的核酸全都是利用细胞中已有的小分子一步一步自我合成的。乙肝、流感、艾滋病 　　食品中的核酸在肠道中被分解 　　食品中的核酸在肠道中将在酶的作用下分解成小分子核苷酸、核苷，而被吸收进细胞中，在细胞中进一步被分解成更小的分子碱基(包括嘧啶和嘌呤两类)。 核酸是生物细胞合成的重要物质，以脱氧核