第二章糖和苷预案.ppt

(五)凝胶柱色谱 凝胶柱色谱可将多糖按分子大小和形状不同分离开来 出柱的顺序是大分子先出柱,小分子的后出柱。 在多糖分离时,通常是用孔隙小的凝胶如sephadex G95、G50等先脱去多搪中的无机盐及小分子化合物,然后再用孔隙大的凝胶sephadex G-200等进行分离。 (六)制备性区域电泳 分子大小、形状及所负电荷不同的多糖其在电场的作用下迁移速率是不同的,故可用 电泳的方法将不同的多糖分开,电泳常用的载体是玻璃粉。 该方法分离效果较好,但只适合于实验室小规模使用,且电泳柱中必须有冷却夹层。 第七节 糖及苷的提取分离 (七) 活性炭柱色谱 ⑴ 分离水溶性物质较好 如：氨基酸、糖类及某些苷类。 ①上样量大，分离效果较好，不受糖溶液浓度改变和无机盐存在的影响，适合大量制备； ②来源容易，价格廉； ③缺点：无测定其吸附力级别的理想方法。 ⑵ 活性炭对物质的吸附规律 对分子量大的化合物吸附力大于分子量小的化合物，即：多糖 单糖 活性炭在水溶液中的吸附力最强，在有机溶剂中吸附力较弱。洗脱顺序： H2O、10%、20%、30%、50%、70%乙醇液 无机盐，单糖等 →二糖 →三糖 →多糖 （八）蛋白质除去法 用分级沉淀法得到的多糖，常夹杂有较多的蛋白质，为除之，通常选择能使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如：酚、三氯乙酸、鞣酸等。 注意：处理时间要短，温度要低。 （避免多糖降解） 三氟三氯乙烷法和Sevag法（用氯仿：戊醇或丁醇4：1混合）在避免降解上有较好效果。 三、多糖的提取分离实例 第七节 糖及苷的提取分离 * 3、酯苷、酚苷的苷化位移规律： 苷化位移值较特殊，端基碳与羰基碳（即苷元α-碳）均向高场方向位移，β-C向低场方向位移。 例如：齐墩果酸在成苷后，其分子结构中既含醇苷、也有酯苷结构。可用于对比有关碳原子化学位移值的变化情况。 端基碳 端基碳 α-C α-C β-C β-C 第五节 糖的核磁共振性质 4、苷化位移有关说明： ① 苷化位移值与苷元的结构有关，与糖的种类无关。 ② 如果苷元为链状结构，则糖端基碳的苷化位移值随着苷元为伯、仲、叔基而递减。 例如：与糖的甲苷化学位移比较，苷元分别为伯、仲、叔基时，糖端基碳的苷化位移值的变化情况如下， β-D-葡萄吡喃甲苷 13C1=104.0ppm β-D-甘露吡喃甲苷 13C1=104.5ppm 第五节 糖的核磁共振性质 端基碳化学位移值下降 -2 -4 -7 第五节 糖的核磁共振性质 ③ 在被苷化的糖分子结构中，通常与端基碳直接相连的α-C的化学位移变化较大些，β-C稍受影响，其他碳原子受到的影响则较少。 ④ 在确定了苷中糖的种类以后，将苷的13C谱数据与相应单糖的13C谱数据进行比较，利用苷化位移规律可确定苷中糖的连接位置。 例如：判断双糖苷中两单糖的连接位置 ◆ 将双糖苷的13C谱数据与相应单糖的13C谱 数据进行比较； ◆ 如果内侧糖的某个碳原子的化学位移向 低场方向移动了（通常是4~7ppm), 而与其 相邻的两个碳原子之化学位移值又略向高场方向移动（约1~2ppm), 则内侧糖的这个碳 原子就是糖的连接位置。 第五节 糖的核磁共振性质 三、红外光谱IR 1.3700～3100cm-1间有明显O-H吸收峰。 2.如糖分子中含羧基、酰基等，则有相应官能团的IR吸收峰可见。 3.多糖在1500～960cm-1有许多吸收峰，其中970～730cm-1间的峰可用作端基碳构型判断。 例如：840cm-1吸收峰 —— α-L-吡喃糖苷 890cm-1吸收峰 —— β-D-吡喃糖苷 第五节 糖的核磁共振性质 四、质谱 1、糖类难挥发，且热不稳定，需要制成挥发性的衍生物才能进行质谱分析。 2、糖的立体异构体往往出现几乎相同的质谱，仅在碎片丰度上稍有区别（不能用质谱来区别糖的构型！）。 3、糖和苷的分子量：可用CI(化学电离), FD-MS、FAB-MS等方法获得分子离子峰后测出。 4、软电离方式得到的碎片峰很少，但有可能获得从分子离子峰按顺序失去一个个糖基后的碎片离子峰。如果事先测定了多糖的组成，则可根据质谱的碎片离子峰信息来推断原糖链的连接顺序。 第五节 糖的核磁共振性质 第六节 糖链的结构测定 ※ 主要解决四个问题 ① 单糖的组成； ② 糖的氧环大小； ③ 糖与糖之间的连接位置和顺序； ④ 苷键构型。 ※糖链的测定： ① 单糖的组成、 ② 单糖的绝对构型测定、 ③ 糖的氧环、 ④ 糖与糖的连接位置和顺序、 ⑤ 苷键的构型 糖链结构的测定 （一）纯度测定方法 1、高压电泳法