第三章糖和苷类化合物预案.ppt

六、苷键构型的决定 ⑴ 分子旋光差（klyne法） ⑵ 酶催化水解方法：酶水解具有高的专属性。可以选择性地催化水解某一构型的苷。 如：麦芽糖酶－水解α-D-葡萄糖苷键 纤维素酶－水解β- D-葡萄糖苷键 ⑶ 核磁共振波谱法： 氢核磁共振波谱（1H－NMR） 碳核磁共振波谱（13C－NMR） 一、糖链结构的测定 主要解决的问题： 1．单糖的组成 2．单糖之间连接位置的决定 3．糖链连接顺序的决定 4．苷键构型的决定 1．单糖的组成 低聚糖、多糖的结构分析，首先要了解由哪些单糖所组成，各种单糖之间的比例如何。 一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，经显色后用薄层扫描仪求得各种糖的分子比。 也可用TLC或HPLC对单糖定性定量。 2．单糖之间连接位置的决定 1）部分水解法： 将糖链全甲基化→水解→甲基化单糖的定性和定量（气相层析） 可以获知被测物中含有的糖的类型、甲基化的位置及相互之间的分子比等。 （1）甲基化单糖中游离-OH的部位就是连接位置 （2）全甲基化的单糖即是末端糖。 2）13C-NMR测定：主要归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。 3．糖链连接顺序的决定 1）缓和水解法：将糖链水解成较小的片段，然后分析这些低聚糖的连接顺序。 2）质谱分析：在了解糖的组成后，根据质谱中的裂解规律和该化合物的裂解碎片推测低聚糖及其苷中糖链的连接顺序。 4．苷键构型的决定 ⑴ 分子旋光差（klyne法） ⑵ 酶催化水解方法：酶水解具有高的专属性。可以选择性地催化水解某一构型的苷。 如：麦芽糖酶－水解α-D-葡萄糖苷键 纤维素酶－水解β- D-葡萄糖苷键 ⑶ 核磁共振波谱法： 氢核磁共振波谱（1H－NMR） 碳核磁共振波谱（13C－NMR） 1）1H-NMR判断糖苷键的相对构型 ① 糖的1H-NMR 性质 化学位移规律： 端基质子： 4.3～6.0ppm 特点：比较容易辨认 用途： 1 确定糖基的个数 2 确定糖基的种类 3 2D-NMR谱上糖信号的归属 4 糖的位置的判断 糖上其余质子信号： 3.2～4.2ppm 特点: 信号集中,难以解析 归属: 往往需借助2D-NMR技术. 甲基质子： ～1.0ppm 特点：比较容易辨认 用途：1 确定甲基五碳糖的个数 2 确定甲基五碳糖的种类 3 确定甲基五碳糖的位置 4 2D-NMR谱上甲基五碳糖信号的归属 偶合常数：与二面角有关 二面角90度 J＝0Hz； 二面角0或180度 J＝8Hz； 二面角60度 J＝4Hz 对于糖质子： 当2-H为直立键时，1位苷键的取向不同，1-H与2-H的两面角不同，偶合常数亦不同： β-D-和α-L-型糖：1-H和2-H键为双直立键， φ=180°，J＝6～8Hz α-D-和-L-型糖：1-H为平伏键，2-H双直立键， φ＝60°，J＝2～4Hz 可通过C1-H与C2-H的偶合常数，来判断苷键的构型（α、β） β－苷 JH1－H2＝6～8Hz α－苷 JH1－H2＝ 2～4Hz 甲基化反应（--OH --OCH3） 方 法 试 剂 溶 剂 特 点 Haworth法 硫酸二甲酯 浓NaOH 全甲基化需反复进行 Purdie法 CH3I+Ag2O THF 不能用于还原糖的甲基化 Kuhn法 CH3I+Ag2O DMF 反应较慢 Hakomori法 CH3I+NaH DMSO 最常用的全甲基化方法 （箱守法） 五、糖链连接顺序的确定： 部分水解法 MS法 13CNMR驰豫时间法 六、苷键构型的确定： 1、酶水解法 2、利用经验公式进行计算 3、1HNMR法 4、 13CNMR法 1HNMR 化学位移（δ）:糖H1在4.2—6.0之间,C5-CH3在1.0左右,其余质子在3.2—4.0之间 偶合常数(J): （1）对优势构象为C1且C2-OH在面下（ Haworth式）或右侧（ Fischer式）的吡喃糖（如葡萄糖、半乳糖、阿洛糖、木糖） β –D或α-L型苷中H1、H2均为a键,J1,2为6—9Hz α-D或β -L型苷中H1为e键、H2均为a键,J1,2为2—3.5Hz （2）对优势构象为1C(如鼠李糖)或 C2-OH在面上（ H