肝癌H22石蜡切片的制作..docVIP

石蜡切片法（一） ---------取材、固定、洗涤、脱水 实验原理 材料的选择是制作切片的第一步，用于制片的动物、植物材料应选择新鲜的，用陈腐的材料制片，往往不能反映材料的真实情况。 固定就是将新鲜材料投入某类化学药液中，借助化学药品的作用使细胞组织的形态保存下来不使其改变形态和变质的过程。 材料经过固定液作用以后，内部渗入很多固定液，一定要把渗入里面的固定液洗去，否则留在材料中的固定液有的会妨碍染色，有的会发生沉淀或结晶，影响观察，有的继续作用，使材料变坏等。所以材料中的固定液必须彻底洗净。 材料经过洗涤后含有大量水分，必须用脱水剂脱尽里面的水分，以利于材料的透明和制片的保存，因为水在里面能使材料分解，而且透明剂与水是不相混合的，只有在完全无水的情况下，透明剂才能完全透入。 实验用品 器材 解剖刀，解剖针，解剖剪，镊子，解剖盘，培养皿，吸管。 试剂 福尔马林-酒精-醋酸混合固定液（简称FAA），10％中性福尔马林，秦克（Zenker）氏液，卡诺（Carnoy）氏液，各级酒精（30％、50％、70％、80％、90％、95％、100％）。 3mm，体积不大于1.5×1.5×0.5cm。材料的选择和切取部位也很重要。 取材的注意事项 取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。 切取材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 切取病理材料时，应特别注意不能将有病的组织损伤，为了和正常无病组织相区别，在取材时除了切取病理材料外，正常的组织也须切取一部分，以便作比较观察。 固定 固定的方法 取到新鲜材料，应按材料的种类、大小、性质和制作要求，立即将材料投入固定液加以固定，使其形态结构和成分被化学试剂固定下来，与生活时保持相仿。 小鼠肝癌组织固定于10％甲醛固定液中。 固定的时间，视材料的种类、大小、性质、固定液的种类与性质、渗透力的强弱等而定，可以从1～2hZenker氏液或Carnoy氏液里，固定时间为12～24h20～301～270％12～24h30％50％、70％、80％、90％、95％2次（使彻底脱水）。对于一些薄嫰、柔弱的材料，可依次经10％、20％、30％……10％2～4mm～2h。 70％2mm×3mm×3mm）3个杯子的时间合计30min已足够；组织块大约（3mm×3mm×10mm）2h左右。 透蜡注意事项 尽量保持在较低温度中进行，以石蜡不凝固为度； 透蜡温度要恒定，不可忽高忽低； 操作要迅速，力求在最短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变脆、收缩等。 包埋 包埋的工具 温台：为了避免在包埋时石蜡立即凝固，包埋要在温台中进行。 酒精灯：放在温台下加温用。 恒温箱：透蜡和包埋都要在恒温箱中进行。 纸盒：作为包埋用的容器。 镊子：要放在恒温箱中预热，否则当移取材料时，镊子尖端的石蜡容易凝固。 面盆或水槽：内放入冷水作冷却石蜡之用。 包埋的操作过程 包埋时，将纸盒放在已经加热的温台上，从恒温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯Ⅲ，迅速轻轻地用温镊子夹取材料平放于纸盒底部（注意切面朝下放置），再用温镊子轻轻拨动材料，使之排列整齐。轻轻将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆或水槽中的水面上，待纸盒内石蜡的表面凝固，即可将纸盒向一侧倾斜，使冷水从一边浸入纸盒，并立即使它沉入水中，使盒中包埋块迅速凝固。待石蜡完全凝固（约30min）后即可取出备用。 石蜡切片法（三） ------切片、贴片 实验原理 切片就是把包埋好的材料块用切片机切成所需要的厚度的切片带。 贴片是用粘贴剂把切片平铺贴在载玻片上，以便于染色。 实验用品 器材 切片机，切片刀，磨刀机或磨刀石，单面刀片，展片台，酒精灯，温度计，蜡铲，台木，毛笔，蜡带盘，载玻片，镊子。 试剂 粘片剂，氯仿。 材料 以包埋好的蜡块。 实验程序 切片 切片前的准备工作 包埋好的石蜡块装在切片机上进行切片前还须做以下的准备工作。 石蜡快的固着：石蜡块要进行切片前，要先把它固着在台木上，然后装在切片机的夹持部分进行切片。石蜡块的固着方法如下： 先将蜡块用单面刀片切成方形或长方形，然后四周留下2～3mm15°左右。 调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般4～10μm40～50r/min20～30cm1～240～45℃37℃的温箱烘干，一昼夜干燥后即可取出存放于切片盒待染。 石蜡切片法（四） ------染色、封藏 染色是生物制片中最重要的环节之一，只有通过染色，细胞和组织才显得更清楚，微小的细胞结构才得以分辨。 实验原理 染色的一般原理 细胞和组织的不同结构