动物的克隆题库.ppt

细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养 (一般繁殖到一定代数后停止生长，需要重新更换培养基） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 动物组织培养技术的发展 动物难以克隆的原因 细胞核移植实验和动物的克隆繁殖 * * 多莉 克隆猴 动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养 动物细胞培养:就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞，然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞得以生存，并保持生长，分裂（繁殖），有规律的衰老，死亡等生命活动现象 （1）离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动？ 只要条件适合就能表现出正常的生命活动，如细胞的分裂、生长等 （2）是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现出生命活动？ 不是，越是幼嫩的细胞越容易培养并表现出正常的生命活动，因此在细胞培养时一般选择幼嫩的细胞 （3）细胞离体培养时，表现出什么样的生命活动？ 生长、分裂（繁殖）至接触抑制 （4）离体的动物组织能否像离体的动物细胞一样表现出体外培养的特征？ 动物组织在离体的情况下，也能培养并表现出正常的生命活动；但与细胞培养也有不同的地方：在得到离体的组织后，需要机械处理或胰蛋白酶处理得到分散的细胞再进行细胞培养，同时动物组织培养过程中可以伴随组织分化。 动物组织培养，长期进行，一般都只有单一类型细胞保存、增殖，因此成了细胞培养。 动物组织培养和细胞培养可统称为组织培养 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50细胞 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 动物细胞生长特性： 1、无菌、无毒 （消毒、灭菌 ；定期更换培养液，清除代谢废物 ） 2、营养 （合成培养基：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等） 3、温度和pH （36.5±0.5℃，PH7.2---7.4 ） 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 动物细胞培养的条件: 动物机体组织 单个细胞 原代培养 胰蛋白酶 机械消化 传代培养 培养过程： 原代培养 细胞株或细胞系 相关概念 细胞系和细胞株 细胞系：可连续传代是细胞 细胞系种类： 1、连续细胞系：原代培养物在首次传代时就成为细胞系，能连续培养下去的细胞系 2、有限细胞系：原代培养物在首次传代时就成为细胞系，不能连续培养下去的细胞系 原因：发生转化，大多数具有异倍体核型 如：恶性细胞系（具有异体致瘤性） 获得不死性（保留接触抑制，不致癌） 细胞株：通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞群，在培养过程中其特征始终保持 细胞株的特点：具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒敏感性和生化特性等 细胞株的种类： 1、连续细胞株：可连续多次传代 2、有限细胞株：可连续传代次数有限 细胞系泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系 真正开始 1885年鸡神经板在生理盐水中培养成活组织培养一词诞生 1903年 皮肤及白细胞培养与腹水和血清中，结果细胞的成活期达1个月，并且看到细胞分裂 1907美国科学家将一部分蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，成功看到了神经纤维末端的阿米巴运动，解决了神经纤维起源问题，并创立了悬浮培养法 萌芽 1951通过对黑人妇女的宫颈癌组织的体外连续培养，获得肿瘤细胞系即不死细胞系-海拉细胞系 1912年鸡胚细胞的培养1943科学家在致癌物20-甲基胆蒽的要倒下培养小鼠结缔组织，获得了能在小鼠体内生长肉瘤的L-细胞系 组织培养工作进入了全新阶段 具 体应用 得到 动 物 组 织 培 养应用 胚胎或幼龄动物的脏器 单 个 细 胞 机械消化、胰蛋白酶消化 原 代 培养 培养液 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等 传代培养 大量的组织细胞(构成组织或器官) 修复受