动物细胞工程的主要技术(细胞培养)题库.ppt

动物细胞的培养过程 * *  专题2 细胞工程 动物细胞工程 概念 常用技术 应用细胞学的方法，按照人们的需要和预定的设计，有目的、有计划地保存、改变动物细胞和创造新的动物细胞，进而培育成新的物种或者品种的一门科学技术。 动物细胞培养（基础） 动物细胞融合 单克隆抗体 动物体细胞克隆技术 一、动物细胞培养 1.动物细胞培养条件 （1）培养基：主要成分有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清。 (天然培养基和合成培养基的主要成分区别是动物血清)等。 （2）气体环境 O? ：细胞呼吸消耗 CO?:调节pH值 （3）温度和pH：哺乳动物细胞培养环境温度控制在36.5℃～37.5℃，Ph7.2～7.4。 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 剪碎组织的目的？ 胰蛋白酶处理的目的？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 原代培养 胰蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 2.动物细胞培养过程 有关概念 原代培养：经过滤、离心后将动物再接种到无菌的培养液中，在适宜的条件下进行静止或慢速转动培养，这个过程成为原代培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 有关概念 　　细胞株：传代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞株传代在40~50代内，遗传物质没有改变；细胞系无限传代下去，遗传物质改变。 有关概念 细胞贴壁： 培养液中分散的动物细胞，置于适宜的条件下，能够分裂，这些细胞贴附在培养瓶上，成为细胞贴壁生长。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。 相关问题 1.为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官和组织做动物细胞培养材料？ 胚胎组织或幼龄动物的组织或器官分裂、增殖旺盛 2.为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 分散成单个细胞便于物质交换，使营养物质吸收及代谢废物排出更容易，利于细胞生长和繁殖 3.为什么用胰蛋白酶处理？ 在动物组织间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，易被胰蛋白酶催化分解，从而使细胞分离开。 相关问题 4.培养的细胞为何贴壁生长？ 大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定的表面生长和分裂 5.动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成生物个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 二 动物体细胞克隆技术 1.概念：是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎始终发育为动物个体。 体细胞核移植技术存在的问题 （1）成功率非常低 （2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题 单克隆抗体制备流程 英国科学家米尔斯坦和德国科学家选用小鼠体内的B淋巴细胞和一种营养缺陷型的骨髓瘤细胞作为实验材料利用聚乙二醇为融合剂，使两种细胞发生融合。然后利用只有杂交瘤细胞才能生长的选择培养液来筛选处理过的细胞群体。骨髓瘤细胞在选择培养液中停止生长，B淋巴细胞在体外培养也只能存活数天，因此只有杂交瘤细胞才可以大量生长、繁殖。利用这种方法培育得到的杂交瘤细胞不但可以像肿瘤细胞那样无休止、快速地进行分裂增殖而且能像B淋巴细胞一样分泌大量特异性抗体。通过杂交瘤细胞培养得到的这些特异性抗体就是所谓的单克隆抗体。 问题1 为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活 问题2 骨髓瘤细胞是癌细胞吗？ 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，而且具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说瘤细胞不等于癌细胞。 问题3 整个制备过程为何要经过两次筛选？ 第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。 * * *