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二、动物细胞工程 常用技术 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 胚胎移植 核移植 阅读课本第71-72页思考： （1）请概括单克隆抗体的概念 （2）根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，思考实验过程与原理？ （3）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？制备过程为何要经过两次筛选？ 1.概括单克隆抗体的概念 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理： 实验材料：小白鼠 实验器材：培养皿、针筒等等。 实验过程：？ （1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？ 单克隆抗体有何应用？ 主要用于疾病的诊断、治疗和预防。与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高的优点。如；各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士，能识别“自己”与“异己”，一旦发现 致病因素便与之结合将其杀死。若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。 因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。 细胞融合技术、细胞培养技术。 第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群。 动物细胞培养 胚胎或幼龄动物的组织器官 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用 途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振 荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 卵细胞 C母绵羊子宫 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 胚胎移植 早期胚胎 多莉羊 分娩 卵裂 融合后的卵细胞 细胞拆合技术 妊娠 多莉羊的培育过程 细胞核移植 * 提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 这些技术的理论基础： 植物细胞的全能性 动物细胞全能性如何？ 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 (一）动物细胞培养 阅读第70页：动物细胞培养，思考回答下列问题 ： （1）动物细胞培养液成分 ？ （2）动物细胞培养过程？ （3）原代培养与传代培养、细胞株与细胞系的区别？ （4）动物细胞培养的应用？ 观看示意图简述融合过程？ 2、诱导动物细胞融合的方法 3、动物细胞融合的用途 制备单克隆抗体 ：仙台病毒 紫外线 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合） 物理法 化学法 生物法 (三)单克隆抗体 提出问题：长期以来，人们为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。 单：单个细胞 克隆:无性繁殖 抗体:化学性质单一、特异性强 2.根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案，回答下列问题： B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。 思考： （2）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？ （3）制备过程为何要经过两次筛选？ 单克隆抗体的制备 抗原 小鼠 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞融合，筛选 细胞培养 筛选，继续培养 体外培养 体内培养 单克隆抗体 绝大多数的单克隆抗体(mAb)是用小鼠开发的，虽然可作为研究和诊断的工具，但它们至少在一定程度上不是理想的治疗剂，：因为它们在人类中有免疫原性。也就是说，小鼠抗体引入到病人体内，将被病人的免疫系统识别为外源物质，并将发生有损治疗抗体利用的人抗鼠抗体(HAMA)应答。已经通过将这些鼠的抗体人源化或直接制备人的mAb来解决。 直接制备人的mAb 通过人的B细胞与骨髓瘤细胞融合， 已经制成了人的抗体，虽然这曾是十分困难的，并且通常在融合前需要用EB病毒感染以无限增殖B细胞。这种方法由于使用病毒而不理想，产生的mAb的特异性是有限的，抗体的产量也很少。最近，通过用人免疫球蛋白基因取代小鼠免疫球蛋白基因创建了产生人抗体的小鼠。因此，当小鼠被免疫时它直接制造出对该抗原的人的抗体，并且产生这些抗体的B细胞可与骨髓瘤细胞融合，产生制造人mAb的杂交瘤。 动物细