动物细胞融合与单克隆抗体(讲课)题库.ppt

2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 植物细胞A 植物细胞B 去掉细胞壁 去掉细胞壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂 分化发育 愈伤组织 杂种植株 温故知新: 植物体细胞杂交过程 一、动物细胞融合 1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。 2、原理： 细胞膜的流动性 为什么灭活的 病毒能作诱导剂？ 3.融合过程： 诱导融合的方法？ 4.结果 杂交细胞 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 P52生物技术资料卡 4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 5.应用： 最重要的用途是制备单克隆抗体 研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤、和生 物新品种等的重要手段 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 使用的酶 诱导方法 结果 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶、果胶酶 胰蛋白酶 物理方法 （离心、振荡、电激） 化学方法（PEG） 物理、化学方法 灭活的病毒 获得杂种植株 形成杂交细胞 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 思考 ？ 1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？ 二、单克隆抗体 1、抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 单克隆抗体的制备 利用效应B细胞：能产生特异性抗体的功能 利用骨髓瘤细胞：无限增殖的特性 利用杂交瘤细胞：既可以无限增殖的、 又能产生特异性抗体的功能 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 原理： 1、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，既可以在体外无限增值、又可以分泌单一抗体 2、细胞两两融合后，有哪些类型？ B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 3、在此过程中需筛选几次？筛选的目的是什么？ 两次，第一次筛选出杂交瘤细胞， 第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。 4、如何筛选出杂交瘤细胞？ 在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有B-(杂交瘤细胞) 存活。而BB,瘤-瘤在此培养基上不能存活。） 6、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。 并进行“单一抗体检测 “克隆化培养”每个杂交瘤细胞 5、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？ 否 7、如何利用杂交瘤细胞来大量生产单克隆抗体？ 体内培养体外培养 8、制备单克隆抗体的过程应用了哪些细胞工程技术手段？ 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体 筛选 杂交细胞 杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 筛选 骨髓瘤 细胞 诱导细胞融合 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖 特点：特异性强灵敏度高可大量制备 注射抗原 免疫 3、单克隆抗体的应用 （1）作为诊断试剂——最广泛应用 准确、高效、简易、快速 （如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） （2）治疗疾病和运载药物 生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤） (“生物导弹” —单抗导向，药物为弹头) ⑶图中B为________过程， 常用_________作为诱导剂 ，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________ 。