蚕豆根尖微核检测..docVIP

蚕豆根尖微核检测 一、实验背景和目的 本组实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用不同牌子0.25mg/mL洗发露（欧莱雅、力士、沙宣）对蚕豆根尖做处理，同时以0.25mg/mL的醋酸铅溶液处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。 洗发露是我们生活中的日用品，洗发露主要成分为：界面活性剂，也就洗干净的成分。以SLS及sls的乙基衍生物类：月桂醇聚醚硫酸酯钠盐、十二酯硫酸铵（月桂酸硫酸酯纳）为主，SLS争议很多，主要表现在对皮肤的刺激性，容易让你头皮变得敏感，虽然SLS也有用在牙膏中，但是在舒适达等国外牙膏中，是没有SLS的存在的，从这一点上，也看出SLS的刺激性是厂商的心知肚明的。 微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的周期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能的应用，各种各样工业废物的排出等都存在污染环境的可能性，欲了解这些因素对机体潜在的遗传危害，需要有一套高度灵敏，技术简单易行的测试系统来监测环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。 目前，国内外不少部门已把微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂的安全评价，以及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。微核检测技术灵敏度高，可靠性强；技术简单，易于操作，而且有显而易见的实用性；实验周期短，且蚕豆根尖细胞周期中大部分时间处于对诱变剂敏感的间期，便于遗传毒性检测试验，精确度也比较高。 本实验为不同牌子洗发露的毒性提供了理论依据，同时引起人们的高度重视，也希望有关部门对日用品中的有害物质含量进行严格控制和检测。 二、实验部分 1．材料与试剂仪器 材料：蚕豆 (为当年生无虫饱满，大小均一蚕豆种子)、3种不同牌子的洗发露（欧莱雅、力士、沙宣） 试剂：5mol/L盐酸，甲醇，醋酸铅，CrO3,NaN3处理液，甲基磺酸乙酯（EMS），蒸馏水，冰醋酸，卡诺氏固定液，乙酸乙酯 仪器：显微镜，计数器，镊子，载玻片，盖玻片，烧杯，磁盘，培养箱，分析天平，水浴锅，酒精灯，剪刀，解剖针，滤纸，铅笔，标签纸，胶水等。 2.实验预处理 实验流程图： 3．实验步骤 3.1 浸种催芽 选择粒大饱满、大小均匀的蚕豆种子按需要量放入盛有自来水的烧杯中 ,在 25 ℃下浸泡 24 h, 期间至少换水 2 次。 种子吸胀后 , 用纱布松散后裹置瓷盘中 , 保持湿度 ,在25 ℃恒温培养箱中催芽12 ～ 24 h , 待初生根长2～ 3mm，取发芽良好的种子，放入铺满滤纸的瓷盘中25 ℃继续催芽，经约36 ～ 48 h, 大部分初生根长至 1 ～ 2cm，根毛发育良好，这时即可用于检测了。 3.2 诱变剂处理 取不同洗发露浓度为0.25mg.mL-1；分别称取洗发露样约0．25 g加水至1L混匀，放置离心机(2000 r／min)中离心20 min，此溶液含洗发剂0.25mg/mL，取适量体积置于培养皿中用于处理蚕豆根尖。 取和洗发水等体积的自来水作阴性对照，用0.25mg／L醋酸铅溶液作阳性对照。当初生根长到2～3cm时，各选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入四个培养皿中中，染色24～27h。 3.3 恢复培养 处理后的种子用自来水和蒸馏水共浸洗 3 ～ 5次 , 每次 2 ～ 3 min，洗净后，再置入铺有湿润滤纸的瓷盘中中,25 ℃恢复培养 22 ～ 24 h 。 3.4 取材、固定 将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的幼根。用卡诺氏液固定24h。 3.5解离、制片观察 用蒸馏水浸洗两次，每次5min，吸干，加入6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10min，幼根软化即可。吸取盐酸，用蒸馏水浸洗三次，每次1～2min，最后浸于水中；取根置于载玻片上，截下1～2mm长的根尖，滴一滴醋酸洋红染液，染色5～8min