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大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建.docVIP

大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建.doc

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大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建摘要分离鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源方法采用不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒大抗原基因的质粒转染骨骺干细胞经嘌呤霉素筛选抗性克隆扩大培养应用抗体和抗体进行免疫细胞化学染色观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线用免疫细胞化学法和检测在转染细胞中的表达结果转染后获得一个阳性细胞克隆免疫细胞化学结果显示抗体染色阳性抗体染色和结果显示已稳定转染入骨骺干细胞转染

大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建 【摘要】 分离、鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。[方法]采用Percoll不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞,利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的质粒pCMVSV40T/PUR转染骨骺干细胞,经嘌呤霉素筛选,抗性克隆扩大培养。应用FGFR-3抗体和PCNA抗体进行免疫细胞化学染色,观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线。用免疫细胞化学法和RT-PCR检测SV

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