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缓冲液培养基配制.
电泳缓冲液、培养基的配制
一、电泳缓冲液、染料和凝胶加样液的配制
1、50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L 2、5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L
3、1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
4、10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)5、6×碱性凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足到10ml 6、6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g补足到10ml 7、6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水 2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1%二甲苯青FF1.5g 补足到10ml 8、6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)3ml 3.9ml 9、6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)4g 补足到10ml 10、10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1%SDS50%甘油 水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10% SDS5ml补足到10ml ?
二、无机溶液配制
1、1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
2、1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
3、10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
4、10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
5、1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
6、8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到
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