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黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究 作者：王海彬， 王军舰 ，黄辉， 刘琳， 刘少军， 徐传毅， 何伟， 樊粤光， 黄志伟 【关键词】 黄芪注射液；,,基因报告系统；,,雌激素受体；,,HeLa细胞；,,配体结合域 　　摘要：目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统，研究黄芪注射液对雌激素受体（ER）活性的影响。方法 PCR扩增雌激素受体配体结合域，将配体结合域克隆到真核表达质粒 pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与雌激素受体的关系；MTT法检测黄芪注射液对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统，黄芪注射液不能提高细胞活性，但对雌激素受体具有激活作用。结论黄芪注射液可能通过雌激素受体发挥疗效，细胞杂交基因报告系统是研究中药作用机理的手段之一。 　　关键词：黄芪注射液； 基因报告系统； 雌激素受体； HeLa细胞； 配体结合域 　　Activating Effect of Astragalus Injection on Estrogen Receptor 　　Abstract:ObjectiveTo establish the Gal4DBD-ER or ERLBD report system to study the effect of Astragalus Injection on ERs.MethodsGene report system was generated by amplifying the ligand binding domain(LBD ) with Pfu polymerase and subcloning the product into the eukaryotic expression vector pCMVBD. This system was employed to study the relationship between Astragalus Injection and ERs. Cell activity were detected by MTT.ResultsGene reporter system using ER-LBD is established. Astragalus Injection can not improve cell activity but can activate ERs activation.ConclusionThe mechanisms of Astragalus Injection may be related to its effect of activating ERs. Gene report system can be used to study the mechanisms of Chinese traditional medicine. 　　Key words:Astragalus Injection； Gene Report system； Estrogen receptor； HeLa cell； Ligand binding domain 　　雌激素受体（Estrogen receptor, ER）是一个核转录因子, 属甾体激素受体家族成员，调控基因表达。ER在1967 年被首次发现［1］， 20 多年来, 它作为内分泌治疗的预测因子被广泛应用。1996 年 ERα首次从大鼠中克隆［2］，其后人和小鼠也相继发现 ERβ的表达［3，4］。ERα和 ERβ的结构、功能存在差异, 在乳腺癌的发生发展中发挥不同作用［5］ 。因而研究药物对雌激素受体的作用，将有利于我们认识药物的作用机理。黄芪主要有补气的作用,在临床上主要治疗以气虚为主证的疾病，在处方中多以君药出现,具有补中益气、补气升阳、益卫固表的作用。为了进一步探讨其作用机理，本研究采用哺乳动物细胞杂交技术研究黄芪注射液对雌激素受体配体结合域的作用，探讨黄芪对雌激素受体的部分作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料Hela 细胞由中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿研究员赠送；DMEM无血清、无酚红培养基、胎牛血清、青霉素和链霉素购自 Hyclone公司；Lipofactemine2000购自 Invitrogen公司；SteadyGlo荧光检测试剂盒购自 Promega公司；细胞培养板均购自 Corning Costar公司；MTT购自 Molecular公司； 黄芪注射液(上海禾丰药业)。 　　1.2 PCR 扩增 hERa-LBDcDNA 　　根据 gene bank报道的 ERs序列（M12