甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌的基因多态性研究.docVIP

甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌的基因多态性研究 【摘要】 　　目的　应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术，对甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌（MRSH）进行基因多态性研究。方法　对81株MRSH通过RAPD技术进行扩增，电泳条带采用SPSS 13.0软件分析，根据树状图分型。结果　81株MRSH通过RAPD技术可产生相对固定的6条电泳带，经遗传相关系数分析后可分为8型，其中A型占70.37%，而10株血培养阳性的MRSH中有9株为A型。 结论　通过RAPD分型研究，可以了解MRSH基因流行型的特性，为该菌的感染控制提供分子流行病学依据。 【关键词】 甲氧西林耐药性 随机扩增多态DNA技术 葡萄球菌属 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To investigate the polymorphism of the methicillin resistant staphylococci haemolyticus （MRSH）by Random Amplified Polymorphic DNA （RAPD） Technique. Methods Eighty one MRSH isolates were collected. The gene of MRSH were amplified by RAPD, the bands were analyzed by SPSS software, the dendrogram were used for cluster analysis. Results There were 6 stable bands produced by RAPD, according to which the 81 MRSH were classified into 8 genetypes. The A type got 70.37% of all isolates，and 9 of 10 MRSH which were isolated form blood were belong to A type. Conclusions RAPD asssy reveals the special epidemic genotypes of MRSH in hospital, which provides molecular epidemiological evidence for strategies to control MRSH infection. 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ methicillin resistance;　random amplified polymorphic DNA technique;　staphylococcus 　　凝固酶阴性葡萄球菌（coagulase-negative staphylococci, CoNS）长期以来被认为是定植于皮肤黏膜对人体无害的共栖菌[1]，但是随着各种移植物的广泛使用和其他侵袭性操作的增加，CoNS已经成为医院感染的重要病原菌[2]。溶血性葡萄球菌的临床分离率在CoNS中仅次于表皮葡萄球菌。而甲氧西林耐药溶血性葡萄球菌（Methicillin resistant sta-phylococci haemolyticus，MRSH）的多重耐药情况则是CoNS中最严重的。多重耐药的MRSH的流行，如果得不到及时的控制，其致死率高达18.8％～57.0％[3]。因此早期发现MRSH感染的流行非常重要。 　　随机扩增多态性DNA（Random Amplified Poly-morphic DNA，RAPD）技术又称随机引物PCR，是一种广泛使用的分子流行病学技术，具有快速、操作简便等特点。已经被用于许多病原菌的分子流行病学研究。本次研究采用RAPD技术对临床分离的MRSH作同源性分析，为控制MRSH感染流行提供基础。 　　1　资料与方法 　　1.1　一般资料　收集2002年4月至2003年4月浙江大学医学院附属第一医院临床分离的溶血性葡萄球菌81株。所有菌株均经生物梅里埃公司API鉴定板重新鉴定，并重新测定MIC证实为MRSH[4，5]。81株菌株主要由移植病房、普外科病房、ICU等病房采集，其中移植病房分离株31株，ICU病房分离株27株，血培养阳性10株，痰培养阳性26株，引流液、腹水培养阳性45株。 　　1.2　试剂和仪器　药敏板、LB培养基等购自杭州天和微生物试剂有限公司；DNA纯化试剂盒Genomic DNA Purification Kit、Taq酶等（由上海申能博彩生物科技有限公司生产）；RAPD引物：ERIC1R 5`-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC