冷鲜猪肉中假单胞菌分离及其鉴定方法1..docVIP

冷鲜猪肉中假单胞菌分离及其鉴定方法 知识背景 假单细菌的一科，是无核细菌。直或稍弯的革兰氏阴性杆菌。以极生鞭毛运动，不形成芽孢，化能有机营养，严格好氧假单胞菌假单胞菌属于，呼吸代谢，从不发酵。模式属为假单胞菌属。此属有29种。其中至少有3种对动物或人类致病。学习假单细菌有助于对冷鲜猪肉的细菌的分离和鉴定。同时加强对革兰氏染色法的认识。 二．实验目的 冷鲜 （1通过了解假单细胞的分离及其鉴定，了解微生物基本特征的异同点，从而分离出所需的特定细胞。 通过假单细菌的分离方法从而掌握一类的原核生物分离方法。学习假单细胞的鉴定方法，掌握原核生物的鉴定方法. 知道常见的细菌分离方法和革兰氏染色法 课堂报告的思路 （1）从假单细胞的基本微生物特征入手，知道假单细胞的生物显微特征和培养特征。 （2）查阅冷鲜猪肉中常见的细菌和假单细菌的生长条件。学习常见的细胞分离个鉴定方法。找出假单细菌和其它细菌的异同点，完成分离。 （3）通过革兰氏染色法完成对假单细胞的鉴定 报告内容 1冷鲜猪肉中常见的细菌 假单细菌 专性需氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌，呈杆状或略弯。菌体大小(0.5～1)×(1.5～4)微米。具端鞭毛，能运动。有些株产生荧光色素或（和） 红、蓝、黄、绿等水溶性色素，不发酵糖类。大多数菌的适温为30℃。DNA中的G+C克分子含量为58～70%。存在于土壤、淡水、海水中。目前已确认有 29种，其中至少有3种对动物或人类致病 热死环丝菌 热死环丝菌生长在对数期的培养物细胞为规则不分枝的杆状，通常（0.6-0.75）um*（1-2）um。它有单生、成对和短链，或伸长似长丝的链，并折叠成环，扭结成群，而此现象在田野环丝菌中未见报道。田野环丝菌的24h培养物是由短的和长杆形菌组成，单个或成对生。热死环丝菌的较老培养物杆菌趋向形成类球状，当再移植于适宜的培养基上，又可发育成为杆形。不论杆形菌和球状菌都是革兰氏染色阳性，但部分细胞可能显示阴性。它们都不运动，不生芽孢和荚膜。热死环丝菌的菌株约有一半可从蔗糖培养液生成粘液。 肠杆菌 肠杆菌属拉丁学名( and Edwards,1960) 直杆状，宽0.6～1.0μm×1.2～ 3.0μm，符合肠杆菌科的一般定义。革兰氏阴性，周生鞭毛（通常4～6根）运动。大多为革兰氏阴性菌。 乳酸杆菌 乳酸杆菌( bacteria)是一群杆状或球状的革兰氏阳性菌，其DNA中G+C含量低于55%，可发酵碳水化合物(主要指葡萄糖)并产生大量乳酸，在自然界分布广泛，是动物和人肠道等处重要的生理性菌群之一。该类群细菌绝大多数对动物和人无毒、无害，负担着动物体内重要的生理功能。 在乳酸菌中，乳酸杆菌是最大的一个属，其定义为杆形乳酸杆菌。乳杆菌属与动物关系最密切，它是动物和人类肠道和阴道中占优势的菌群之一 2分离方法 冷鲜猪肉中的优势菌因不同的贮藏条件而不同，通常有氧条件下，荧光假单细胞为优势菌种之一，当在无氧条件下，乳酸菌为优势细菌之一。故选取实验样品时，应该现现在有氧条件下，放置一段时间，使假单细胞成为优势菌，从而容易从冷鲜猪肉中分离出来。 （1）实验样品 选取超市中严格按照冷鲜猪肉工艺生产的冷鲜猪肉，保鲜膜托盘包装。 （2）培养基和试剂 琼脂 蒸馏水1000ml 5 121℃培养皿 离心机 移液器 葡萄糖 （3）菌落分离 先将琼脂中加入蒸馏121℃高压灭菌15min.。将新鲜猪肉搅碎，分别加在培养基在无菌有氧的条件下，通过假胞菌菌落的微生物特征（假单细菌在该培养基上为优势菌种），从而分离出假单细胞。 3假单细胞的鉴定 (1)革兰氏染色法 细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。 （2）革兰氏细菌的特点 革兰氏阳性菌细胞壁较厚，约20～80nm。肽聚糖含量丰富，有15～50层，每层厚度1nm,约占细胞干重的50～80%。此外，尚有大量特殊组份磷壁酸( acid)。磷壁酸是由核糖醇()或甘油()残基经由磷酸二键互相连接而成的多聚物。磷壁酸分壁磷壁酸(wall acid)和膜磷壁酸(membrane acid)两种，前者和细胞壁中肽聚糖的n-乙酰胞壁酸连结，膜磷壁酸又称脂磷壁酸 革兰氏阳性菌 acid)和细胞膜连结，另一端均游离于细胞壁外。磷壁酸抗原性很强，是革兰氏阳性菌的重