雌激素肝损害..docxVIP

雌激素诱导miRNA-29表达在CCl4诱导大鼠肝损害中的保护作用背景：雌激素（estradiol，E2）缓解CCl4诱导肝纤维化的潜在机制仍不清楚。结果：miRNA-29在CCl4处理的雌雄大鼠中的表达存在差异。E2和表达miRNA-29a/b的腺病毒可以增加肝内miRNA-29a/b水平且缓解CCl4诱导肝纤维化。结论：E2通过诱导miRNA-29a/b抑制CCl4诱导肝损害。意义：了解miRNA-29对肝纤维化的作用/调控并提供新的治疗靶点。摘要：以前研究表明雌性动物比雄性动物更容易耐受CCl4诱导肝纤维化，E2可以抑制CCl4诱导的肝纤维化。然而，这种现象的潜在机制仍没有完全阐明。本研究报道E2诱导miRNA-29表达对CCl4诱导肝损害的作用。在用CCl4处理的雌雄大鼠中，肝内miRNA-29表达存在差异。尤其在CCl4处理4周后的雄性而非雌性大鼠肝内miRNA-29a和miRNA-29b表达明显下降。在雄性大鼠肝内miRNA-29a和miRNA-29b表达下调与肝纤维化进展早期相关，结果显示相对于雌性大鼠，雄性大鼠的纤维化标志物表达增加。此外，在雌性大鼠E2比雄性大鼠一直保持更高水平。TGF-β1在大鼠肝癌细胞IAR20和正常肝细胞中减少miRNA-29a/b表达。相反，E2通过抑制NF-κB信号通路提高miRNA-29a/b表达，NF-κB信号通路负性调控miRNA-29表达。进一步研究发现E2和静注表达miRNA-29的腺病毒可以显著增加miRNA-29a/b水平和缓解CCl4诱导肝损害大鼠的肝脏纤维化标志物表达。总之，E2通过诱导肝内miRNA-29抑制CCl4诱导肝损害。纤维化以过量沉积细胞外基质（ECM）为特征，尤其是胶原。肝纤维化是慢性肝病的一种常见结局，最终可能进展为肝硬化和肝衰竭。CCl4诱导肝纤维化与不同病因引起的人肝纤维化有一些共同特征；相应地， CCl4诱导肝纤维化已作为纤维化模型[1-3]。本课题目的是研究雌雄大鼠对CCl4的不同纤维化反映及E2抑制肝纤维化的潜在机制。以前研究已在动物中观察到对非酒精性纤维化诱导因素（如CCl4）表现出性别差异[4]，雌性动物相对于雄性大鼠更耐受CCl4诱导肝纤维化。通过研究这些差异，数个研究已证实E2抑制CCl4诱导肝纤维化动物模型具有保护作用[5-7]。Yasuda等[6]报道E2降低I型和II型前胶原以及金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）mRNA水平。也有研究发现在卵巢切除后的雌性大鼠，用E2替代治疗抑制纤维化，而用E2特异性抗体或卵巢切除雌性大鼠中E2的保护作用消失，E2水平也明显下降。Liu等[5]报道17β-E2缓解肝纤维化、改善肝功能（指标为ALT和AST）。Shimizu等[8]在大鼠肝星状细胞（HSC）中观察到E2抑制肝纤维化的保护作用可能与抑制HSC激活有关。虽然已知E2作为强大的内源性抗氧化剂，通过抑制活性氧化剂或间接调控细胞因子和其他生长因子的合成和释放，达到抑制肝纤维化作用，但E2抑制肝纤维化的潜在机制仍没有完全阐明。微小RNA（miRNA）是长约22nt的非编码RNA，与细胞靶基因mRNA的3’非编码区序列不完全互补配对调控转录后基因表达[9-11]。以前研究已表明miRNA在细胞各个过程中起作用，包括细胞增殖、分化和凋亡。大量研究报道miRNA异常表达会导致多种疾病的发生发展。许多报道表明miRNA在HSC激活过程中起着重要的作用。对激活型大鼠HSC中miRNA表达分析证实了miRNA表达上调或下调[12]。也有研究证实过表达的miR-16和miR-15通过下调线粒体相关抗凋亡蛋白Bcl-2，导致caspases3、8、9激活，从而抑制HSC增殖和诱导凋亡[13]。这些发现表明miRNA通过激活HSC在肝纤维化进展中起着重要的作用。miR-29家族（包括关键胶原调节分子miR-29a和miR-29b）也参与了组织纤维化[14-16]。在心肌梗死过程中，人和鼠的心脏边界miR-29a和miR-29b表达下调[17]。此外，miR-29作为一个主要调节分子参与了肺纤维化[15]。最近，Roderburg等[16]在分析了CCl4诱导肝纤维化大鼠模型的miRNA调节基因芯片后，发现在CCl4诱导及胆管结扎后大鼠的肝脏中miR-29家族中所有成员均下调；此外，在细胞水平上，在大鼠HSC中过表达miR-29b引起胶原表达下调。在目前的研究中，我们发现了在E2抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化中的保护作用与雌雄大鼠肝脏中miR-29不同表达水平之间存在相关的特点，并发现在经4周CCl4处理的雄性而非雌性小鼠的肝脏中miR-29（miR-29a和miR-29b）水平显著下降，在雄性大鼠肝脏中miR-29a和miR-29b下调与肝纤维化加速进展密切