第5章 毛细管电泳解析.ppt

第五章 毛细管电泳 高效毛细管电泳分析 high performance capillary electrophoresis 高效毛细管电泳的特点（书P144有6点） 5.1.2 高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 电渗现象与电渗流 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 3.HPCE中电渗流的大小与方向 HPCE中电渗流的方向 4. HPCE中电渗流的流形 5. HPCE中电渗流的作用 HPCE中影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis 3. 电解质溶液性质的影响 4. 温度的影响 5. 添加剂的影响 淌 度 HPCE中的参数与关系式 3.分离度 5.2 高效毛细管电泳仪 仪器流程与主要部件 1.高压电源 3.缓冲液池 毛细管电泳的进样方式 2. 电动进样方式 5.3 分离模式 一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE 二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE 三、 胶束电动毛细管色谱（MECC ，MEKC）micellar electrokinetic capillary chromatography，MEKC 四、毛细管等电聚焦 capillary isoelectric focusing，CIEF 五、毛细管等速电泳 capillary isotachophoresis ，CITP capillary isotachophoresis ，CITP 六、毛细管电渗色谱 capillary electroosmostic chromatography ，CEC 5.4 影响分离率的因素及操作条件的选择 3.焦耳热与温度梯度的影响 4.溶质与管壁间的相互作用 5.其他影响因素 5.5 毛细管电泳的应用 阴离子分析 药物分析 analysis of pharmaceutics 手性化合物分析 氨基酸与蛋白质分析 蛋白质分析 核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA 新进展advances and special topics 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。 在电场力的作用下，胶束在柱中移动。 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动； 5.色谱与电泳分离模式的结合。 3.中性分子在胶束相和溶液（水相）间分配，疏水性强的组分与胶束结合的较牢，流出时间长； 4.可用来分离中性物质，扩展了高效毛细管电泳的应用范围； 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零； 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离； 5. 阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液； 6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测； 7. 电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； 4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用； 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程； 1.纵向扩散的影响 在HPCE中，纵向扩散引起的峰展宽：σ2=2Dt 由扩散系数和迁移时间决定。大分子的扩散系数小，可获得更高的分离效率，大分子生物试样分离的依据。 2.进样的影响 当进样塞长度太