实验6 a-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测.ppt

（二）包埋法 （三）共价偶联法酶蛋白分子上的功能基团和固相支持物表面上的反应基团之间形成共价键，因而将酶固定在支持物上。 * 一 、酶的固定化 固定化酶：将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 实验6 α–淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用 固定化酶 对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量 催化效率高，低耗能、低污染等 直接使用酶 不足 优点 类型 直接使用酶和固定化酶的优缺点 (一)吸附法 将酶液与具有活泼表面的吸附剂接触，再经洗涤除去未吸附的酶便能制得固定化酶。是最简单的固定化技术，在经济上也最具有吸引力。 二、 酶的固定化方法 将酶分子包埋在高聚物网格内的包埋方法。 （四）交联法 酶分子和多功能试剂之间形成共价键得到三维的交联网状结构。 实验原理：本实验是用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成 淀粉 α-淀粉酶 糊精 β-淀粉酶 葡萄糖 糖化淀粉酶 麦芽糖 这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为50-75℃；最适pH为5.5-7.5 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 三、实验 设备及用品:5ml塑料注射器、50ml烧杯、滴管、自行车用气门心及夹子、注射器架、试管及微量离心管3支 材料: 1.a-淀粉酶的固定化:在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中.由于酶不纯,可能有些不溶物.再加入5g石英砂,不时搅拌,30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml).用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min. 2.可溶性淀粉溶液:取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀. 3. 5mmol/L KI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 酶固定在石英砂上 淀粉 糊精 步骤: 1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱。在流出5ml后接收0.5ml流出液,加入1-2滴KI-I2溶液,观察颜色.用水稀释1倍后再观察颜色。 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 淀粉 前5mL不用是可能反应不充分，糊精少 2.实验后，用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱，放置在4℃冰箱中，几天后再重复上述实验，看是否有相同的结果。 淀粉溶液加指示剂 亲和层析洗脱液加指示剂 洗去残留淀粉