尹礼国第5章 酶学1021.ppt

（2）特点： ① 抑制剂I与底物S在化学结构上相似，能与底物S竞争酶E分子活性中心的结合基团. 例如，丙二酸、苹果酸及草酰乙酸皆和琥珀酸的结构相似，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 ②抑制程度取决于抑制剂与底物的浓度比、 〔ES〕和〔EI〕的相对稳定性； ③加大底物浓度，可使抑制作用减弱甚至消除。 很多药物都是酶的竞争性抑制剂。例如磺胺药与对氨基苯甲酸具有类似的结构，而对氨基苯甲酸、二氢喋呤及谷氨酸是某些细菌合成二氢叶酸的原料，后者能转变为四氢叶酸，它是细菌合成核酸不可缺少的辅酶。由于磺胺药是二氢叶酸合成酶的竞争性抑制剂，进而减少细菌体内四氢叶酸的合成，使核酸合成障碍，导致细菌死亡。抗菌增效剂-甲氧苄氨嘧啶(TMP)能特异地抑制细菌的二氢叶酸还原为四氢叶酸，故能增强磺胺药的作用。 磺胺药物的抑菌作用 2）非竞争性抑制(non-competitive inhibition) (1)含义和反应式 酶与底物结合后，可再与抑制剂结合，酶与抑制剂结合后，也可再与底物结合。在抑制剂存在的情况下，增加底物浓度不能达到没有抑制剂存在时的最大速度。 （2）特点： ① I和S在结构上一般无相似之处，I常与酶分子上结合基团以外的化学基团结合，这种结合并不影响底物和酶的结合，增加底物浓度并不能减少I对酶的抑制。 ② 非竞争性抑制剂并不影响酶促反应的Km值，而是使Vmax值变小 3）反竞争性抑制 (1)含义和反应式 反竞争性抑制剂只能与酶-底物中间复合物结合，使得Km、Vmax都变小。 第六节 酶活力的测定 一、酶活力的测定 由于从生物原材料中提取出来的酶纯度有限，仅依据体积与质量不能评估酶的多少，需要知道酶制剂具有多大的催化能力。 测定酶活力的方法 测定一定时间内的化学反应量 测定完成一定量反应的时间 酶活力单位 酶活力单位：单位时间内被酶作用的底物的减少量或产物的生成量 IU(International unit):在最适反应条件（温度25℃）下， 1分钟内催化1微摩尔底物转化的酶量为一个酶活力单位（1961年，国际生化协会酶学委员会） （二）酶的活力单位： 1961年国际生化协会酶学委员会统一规定，酶的国际单位（IU）规定为：在最适反应条件（温度25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol）底物转化为产物所需的酶量（或1分钟内转化底物生成1微摩尔产物的酶量）称为1标准单位。 测定条件：最佳的反应条件，如最适的T（或25℃）、最适pH、[S] [E]、初速度下。 1972年国际生化协会又推荐一种新单位，即Katal(Kat)单位。规定：在最适温度下，每秒钟能催化1摩尔底物转化的酶量定义为 1 Kat。1 Kat=60×106 IU . (三)酶的比活力： 每单位酶蛋白（或每毫克蛋白氮）所含的活力单位数。 对固体酶：用活力单位/mg酶蛋白、或活力单位/mg酶蛋白氮来表示； 对液体酶：用活力单位/ml酶液来表示。 很明显，比活力越大，酶越纯。 （五）酶活力的测定方法 1、分光光度法：产物与适当的化学试剂生成有色物质 或产物有紫外吸收的能力可采用此法。 2、测压法：产物中有气体，测气压增加量。 3、滴定法：产物中有酸生成，用碱滴定。 4、荧光法：产物中有荧光物质生成或产物与荧光试剂 反应生成荧光产物可用此法。 5、旋光法：产物中有旋光物质可采用此法。 除了以上方法外，还可根据产物的性质采用其它方法。 第七节 酶的多样性 一、变构酶与变构调节 （一）调节酶：凡能通过构象变化或亚基解聚或亚基修饰等方式来改变酶活性而对代谢起调节作用的酶称为调节酶。 变构酶又称为别构酶，指调节物与酶分子的调节部位以非共价键结合后，引起酶的构象的改变，进而改变酶的活性状态，酶的这种调节作用称为变构调节，具有变构调节的酶称变构酶。 凡能使酶分子发生别构作用的物质称为变构剂或调节物 调节物能使酶活性增加的效应叫正协同效应，该调节物叫正调节物（如底物） 调节物能使酶活性降低的效应叫负协同效应，该调节物叫负调节物 酶的别构（变构）效应示意图 效应剂 别构中心 活性中心 别构酶的反馈调控机理 A （产物或中间产物） E D C B 关键酶 — 二、共价调节酶 1、概念： 也称共价修饰酶，通过其它酶对其多肽链某些基团进行可逆共价修饰，使处于活性与非活性的互变状态，从而调节酶活性；共价修饰主要是磷酸化、腺苷酰化、甲基化等。共价调节酶是寡聚酶，且在每个亚基上都含有共价修饰的位点。 三 、同工酶 同工酶(isoenzyme)是指催化的化学反应相同，酶蛋白的分子组成形式、理化性质乃至免疫学性质