液相色谱维护全解.ppt

异常色谱行为与衬管的关系 1．拖尾峰： 可能原因：是柱和进样衬管吸附样品组分或污染镀金进样口密封垫；注射器针头撞击进样衬管内填充物破碎；柱末端切口不整齐（会使样品产生吸附）；衬管断裂。 排除方法：换新的去活衬管；拆下色谱柱，清除污染物，用性能可靠的毛细管熔融石英切割工具将柱切成齐口，然后重新安装色谱柱；调节进样口总流量在40ml/min以上。 2.前伸峰（leading peaks） 可能原因：样品分解。 排除方法：用新的去活衬管。 3.出峰后基线上升 可能原因：样品分解。 排除方法：用新的去活衬管。 4.大峰后基线变化 可能原因：色谱柱末端和衬管不在同一轴线上。 排除方法：检查末端和进样口衬管安装，必要时调整它，使柱入口端和衬管在同轴上。 5.未分离峰 可能原因：色谱柱或进样衬管污染或柱效变坏。 排除方法：用新的去活衬管。 液相色谱系统的故障有多少与溶剂和样品的过滤有关 1．过滤膜的类型 聚四氟乙烯膜（一般用于有机相）几乎可以和所以的溶剂、酸和碱相容。 尼龙66膜（一般用于有机相）可以和大多数溶剂、有机物和水相容，建议不要用于强酸、二氯甲烷和DMF。 纤维素硝酸酯(一般用于水相)主要用于过滤器,可以和多数水性和非水性溶剂相溶,但不是所有的水性和非水性溶剂. 再生纤维素膜一般用于HPLC生物样品和有机溶剂的制备和过滤,是通用型HPLC过滤器,具有广泛的溶剂相溶性,与蛋白质键合作用低,非常低的可萃取性. 2、在样品溶液中有颗粒存在会造成故障时要用膜进行过滤. 3.流动相 溶剂的污染,特别是水相缓冲溶液的污染是HPLC中常见的问题,水相介质是微生物生长的良好环境,而微生物可以堵塞HPLC系统,并造成背景噪音. 4.溶剂入口过滤头 未经过滤的溶剂或溶剂瓶中生长的微生物都会降低溶剂入口过滤头的寿命,并影响泵性能.一般3个月清洗或更换. 5.测试溶剂入口过滤头是否堵塞 将溶剂入口管从过滤头和瓶盖组件处拨下,如果管线中充满溶剂,当过滤头性能良好时,溶剂会自由地从管中滴出．如果堵塞，就没有溶剂或只有很少量的溶剂从管中滴出． 6、不要使用超声清洗溶剂入口过滤头，否则玻璃颗粒可能是破碎造成堵塞． 气相色谱毛细管柱安装 熔融硅毛细管柱组成： 琥珀褐色（或淡黄色）聚酰亚胺（—[—CO（CH2）34CON=CH（CH2）5NH—]n—）涂渍在管外壁保护管防止其破裂；熔融硅空心管；均匀涂布在管内壁的固定相（常用的有聚硅氧烷Si(CH3) 3 O[Si(CH3) 3O] n Si(CH3) 3、聚乙二醇、HO（CH2 CH2O）nH、固体吸附剂多孔层开管PLOT（Al2O3、分子筛、苯乙烯基苯、二乙烯基苯-乙二醇二甲基丙烯酸酯）。 柱安装工具： 柱切割工具如钻石、陶瓷片、宝石铅笔刀；适当的不保留化合物；柱测试物；电子流量计；电子检漏计（后三种为可选件）。 安装步骤1： 检查净化管、载气、隔垫、衬管：必要时更换净化管；在进样口换新隔垫：必要时换衬管及镀金平板（特别是进了大量脏样品和分析活性高化合物后）。柱的固定液室温下容易被氧化损坏，可以使用充载气保存延长使用寿命和减少噪音，推荐使用带有指示色的高容量的脱氧管，带有指示色的脱水管应安装在脱氧管前。 安装步骤2： 套上柱螺母和密封垫、切割柱：在柱两端安装柱螺母和密封垫，将柱固定在柱箱中，铭牌朝外。切去柱两端约5cm，切割方法：戴不起毛手套，手指将柱固定，用切割工具在适当位置划一切口，不能来回切割，也不要用切割工具完全切断。两手相向掰去柱切割部分，用放大镜检查切口，应边缘平整、无毛刺等。否则重新切割。 安装步骤3： 进样口、检测器处柱的安装：柱安装在柱箱中，边缘不要与柱箱接触；展开柱使之成圆滑的弧形，避免在紧固时使柱断裂；依据进样口类型和检测器要求确定柱露出长度；用手旋紧柱螺母，再用扳手旋紧，但不要超过1/4圈；装好后不要再旋动柱；密封垫在加热后会结合更紧密。 安装步骤4： 开载气：调整柱头压获得合适的载气流量，下表是推荐值，实际使用的可根据载气线速度确定。 将柱出口端浸入正已烷，可见气泡，否则，检查载气，流量阀，检漏，装柱前挥去残留溶剂。载气种类选择：对毛细柱首选的载气为高纯氦和氢气，不推荐使用氮气。对极小口径的如0.1mm内径的毛细柱使用氢气。载气纯度至少99.995%并且氧含量低于1ppm。但应注意氢气混合在空气中浓度在4%-10%时容易发生爆炸。 安装步骤5： 检测器端柱安装：按步骤2和3进行安装，用流量计测定柱载气流量。 安装步骤6： 检漏：GC系统在加热前要检漏，电子检漏计是最可靠的和最合适的，不要使用皂沫。可以适当使用异丙醇与水（5+5）的混合液。 安装步骤7： 确定载气流量和正确的柱安装：有EPC电子流量控制的可以直接设定载气速度或流量，但