(高效液相色谱法研究白藜芦醇光致异构化动力学与平衡常数二.docVIP

高效液相色谱法研究白藜芦醇光致异构化动力学与平衡常数（二） 1.结果与讨论 1.1 ＨＰＬＣ 方法的建立 以实验部分1.4节色谱条件测定反式异构体标准曲线溶液，结果显示保留时间为 ７.４ ｍｉｎ 的色谱峰对应的 紫外吸收曲线在３０４ｎｍ 处吸收最大，以峰面积（ｙ） 为纵坐标，浓度（ｘ， μｍｏｌ ／ Ｌ）为横坐标，回归方程见 表 １。 结果显示在 １.５ ～ ６０ μｍｏｌ ／ Ｌ 浓度范围内线 性关系良好，Ｒ ２ 达 ０.９９９。 测定顺式异构体标准曲线溶液（见图 １），结果显示在 ７.４ ｍｉｎ 处的吸收峰 面积大幅减小，在 １１.２ ｍｉｎ 处产生一个新的色谱 峰，所对应的紫外吸收曲线在 ２８５ ｎｍ 处吸收最大， 与顺式异构体的紫外吸收曲线一致，经液相色谱?高 分辨质谱（超高效液相色谱仪，日本岛津公司；Ｑ? ＴＯＦ ５６００ 质谱仪，配电喷雾离子源，美国ＡＢ公司； ＰｅａｋＶｉｅｗ １.２ 软 件 ） 分析， 检索得化学式为 Ｃ１４Ｈ１２Ｏ３ 。 采集 ３０ ｍｉｎ 色谱图，未检出其他色谱 峰，原因可能是异 构化条件有差异。 以反式异构体回归方程计算反式异构体的浓度，然后与相应反式异构体的初始浓度 相减，作为顺式异构体的浓度，顺式异构体的回归方 程见表 １。 结果显示在 １.５ ～ ５５ μｍｏｌ ／ Ｌ 浓度范围 内线性关系良好。 同一溶液连续重复进样 ６ 次，峰面积的 ＲＳＤ 小 于 ０.５％，表示仪器性能良好。 ２５ ℃下避光放置，测 定 ０、２、４、８、１６、２４ ｈ 时的 ３０ μｍｏｌ ／ Ｌ 顺、反异构体 ５０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液，峰面积的 ＲＳＤ 均小于 ０.５％，说明在２５℃避光时反式异构体稳定，顺、反平衡液 稳定（见图 １）。 平行配制 ６ 份反式异构体浓度为 ３０.０ μｍｏｌ ／ Ｌ 的 ５０％ （ ｖ ／ ｖ） 乙醇溶液，分别进样分 析，以峰面积代入反式异构体的回归方程计算浓度， 反式异构体回收率达 ９８.５％，方法准确性较高。 顺、 反式标准曲线溶液最低浓度点逐步稀释，以 １０ 倍信 噪比时的浓度为定量限，以 ３ 倍信噪比时的浓度为 检出限，结果见表 １。 1.2光致异构化动力学及影响因素 基于药物分析检查之一的溶出度试验模拟胃酸液的 ｐＨ、葡萄酒的酸度与酒精度，以及提取分离分 析的常用介质，并考虑一般行为所处环境，本实验选 择了 ｐＨ １.２ 水溶液、１０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液（ｐＨ ４）、 ５０％ （ｖ／ｖ）乙醇溶液作为白藜芦醇光致异构化试验 介质，在室内自然光条件下进行异构化实验。 分别测定光致异构化溶液，结果显示：光照使反 式转变为顺式的速度与溶液介质有关，ｐＨ 越高转化 速度越快，ｐＨ 越高顺式比例越大；在测定时间内室 温避光放置后顺式与反式达到平衡。 测定低温避光 稳定性实验溶液，结果显示顺、反式白藜芦醇在 ５０％ （ｖ ／ｖ）乙醇溶液中低温（４ ℃） 避光 １５ ｄ 内稳 定，峰面积的 ＲＳＤ 均小于 ０.５％，显示异构化达平衡后溶液稳定。 （ ｃ０ ： 起始浓度， ｃ ｔ ｔｒａｎｓ：某时刻的反式异构体浓度）公式，采用反式异 构体浓度计算各时间点的异构化率，以时间为横坐 标，转化率为纵坐标作图（见图 ２）。 以浓度负对数对时间计算回归方程，结果显示， 白藜芦醇在 ｐＨ １.２ 水溶液、１０％ （ ｖ ／ ｖ） 乙醇溶液 （ｐＨ ４）介质中 ５ ｈ，在 ５０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液介质中 ４ ｈ 线性关系良好，Ｒ ２ 均大于 ０.９９５（见图 ３）。 根据一级反应（ ｃＡ０ ：反应物起始浓 度；ｃＡ：测定时反应物浓度；ｋ：速率常数；ｔ：时间）公 式可得 ｌｎｃＡ ＝ ｌｎｃＡ０－ｋｔ，说明反式白藜芦醇光致异 构化为一级反应，达到平衡前在 ｐＨ １.２ 水溶液、１０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液（ｐＨ ４）和 ５０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液中的速率常数依次为 ０.３８１、０.３３３、０.６６１ ｈ－１ 。 1.3 光致异构平衡常数 在光致反式异构化达到平衡后，溶液稳定，采用顺式异构体标准曲线计算顺式异构体浓度，并求顺、 反式异构体浓度的比值，以标准曲线制作项及光致 异构化达平衡溶液所测定结果计算白藜芦醇在 ５０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液中的顺式与反式异构体的平衡常数，结果见表２。 1.4 乙醇浓度与溶液ｐＨ的影响 为进一步考察溶液介质对稳定性的影响，本实 验以 ５０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液、１０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液（ｐＨ ４）、ｐＨ１.２ 水溶液、５０％ （ｖ ／ ｖ）乙醇溶液（ｐＨ ７.４）、 ｐＨ ７.４ 水溶液和 ｐＨ ９.０ 水溶液为介质，在不同时 间点依次分析各溶液，考察反式白藜芦醇溶液的避 光稳定性。 测定结果显示，不同于在其他介质中产 生异构