细胞观察.ppt

细胞观察 倒置显微镜观察：活细胞观察 普通光学显微镜观察：化学染色标本 如HE染色，免疫组化染色标本等 扫描电镜观察：细胞表面形貌 透射电镜观察：细胞内部超微结构 倒置相差显微镜观察 原理 　　　活细胞无色透明，当光波通过它时，颜色和亮度变化不大。 　　　相差显微镜是利用细胞内结构密度的不同而对光产生折射率有差异的原理，使肉眼不能分辨的相位差变为可分辨的振幅差（即明暗差）。 倒置相差显微镜观察 调节光轴 倒置相差显微镜观察 合轴调节 倒置相差显微镜观察(暗反差) 倒置相差显微镜观察(明反差) 活细胞荧光染色观察 活细胞丫啶橙染色呈绿色 凋亡细胞与溴化乙锭共染呈橙色 扫描电镜观察 透射电镜观察 血球计数板法 制备细胞悬液：细胞密度＞104/ml, 细胞过多时需适当稀释,单个细胞率95%。 加样：混悬细胞，取少许细胞悬液，从计数池一侧加入，不要溢出或出现气泡。 计数：10倍物镜下计数四角大方格内的细胞，压线者只计左边线和上边线。 计算：细胞数/ml=（4四大格细胞总数／4）×104×稀释倍数 细胞密度调整 稀释公式：C1·V1＝C2·V2 稀释前细胞密度C1，溶液体积V1 稀释后细胞密度C2，溶液体积V2 细胞活力测定－台盼蓝染色法 制备单个细胞悬液：105～106／ml 0.4%台盼蓝染色1 min (9滴细胞悬液＋1滴0.4%台盼蓝)， 3min 内计数 用血细胞计数板镜下分别计数活细胞（染料拒染）和死细胞（呈淡蓝色） 计算细胞活力： 活细胞率（％）＝［活细胞数／（活细胞数＋死细胞数）］×100 细胞生长曲线测定－计数法 细胞ＨＥ染色 细胞标本制备 　悬浮生长细胞：涂片法 　贴壁生长细胞：铺片法（细胞生长在盖玻片上） 细胞固定 　取出细胞片，PBS浸洗，95％酒精固定15min（４℃下可保存１周） 细胞ＨＥ染色 PBS洗１次 苏木精染5～10min 自来水漂洗 稀盐酸酒精分色约3秒 淡氨水使胞核蓝化数秒 自来水漂洗 伊红染5～10min 过70％、80％ 、90％酒精，各1min 过95%酒精2次，各1min；100％酒精2次，各1min 过二甲苯3次，各1min，中性树脂封片 细胞HE染色观察 细胞计数实习 8人一组，提供2块计数板 提供的细胞悬液密度为106／ml,4倍稀释计数(3份培养液＋1份细胞悬液) 按10倍稀释方法，制备3种密度的细胞悬液，即105、104 、103 ／ml， 稀释方法：9份培养液＋1份细胞悬液， 根据提供的移液器（50 、 100 、 200）调整稀释 盖玻片与计数板成垂直方向放置 细胞HE染色实习 8人一套染色缸 细胞片在酒精缸, 取出细胞片,用PBS浸洗后再染色 染色完成后,省略树胶封片。如果想观察染色结果，可将有细胞的一面贴在载玻片上。 * * *